一、基本原理
細菌細胞壁很薄，革蘭氏陽性菌的細胞壁為20—30nm，革蘭氏陰性菌的細胞壁為10—13nm。組成細菌細胞壁的主要化學成分是肽聚糖，它與染料結合的能力差，不易著色，在細菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞，細胞壁本身並未染色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設法使細胞壁能著色，而細胞質則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的複合物，而使細胞質不易被著色，經結晶紫或甲基綠染色後，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理後，會產生質壁分離這一現象，經染色後也可在普通光學顯微鏡下區分細胞壁和細胞質膜。
二、器材
巨大芽孢杆菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢杆菌；
0．2％結晶紫水溶液，5％單寧酸（鞣酸）水溶液，1％磷鉬酸水溶液，1％甲基綠水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％結晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，乙醚，乙醚蒸氣瓶等。
三、操作步驟
1．單寧酸法
(1)將培養16—18小時的巨大芽孢杆菌按常法製成塗片。
(2)用5％單寧酸染5分鍾後，水洗。
(3)用0．2％結晶紫染3—5分鍾，水洗，吹幹。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
2．磷鉬酸法
(1)製備濃厚的塗片，在未幹時浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鍾。
(2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鍾。
(3)水洗後，吹幹，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質無色。
3．區分細胞壁與細胞質膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢杆菌塗布於蓋玻片上，翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鍾。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鍾後取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒鍾。
(d)水洗，水封，置油鏡下觀察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液於潔淨的載玻片上。
(b)挑一小環培養6小時的枯草芽孢杆菌，在25％NaCl水滴中塗布均勻，待自然幹燥。
(c)滴加0．01％結晶紫於其上，使蓋滿有菌部分，30秒鍾後水洗，幹燥，用油鏡觀察結果。
四、實驗報告
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