一、基本原理
所謂單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用於菌體一般形態的觀察。
在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，所以常用堿性染料進行染色。堿性染料並不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時染料離子帶正電，易與帶負電荷的細菌結合而使細菌著色。例如，美藍（亞甲藍）實際上是氯化亞甲藍鹽（methylenebluechloride，縮寫為MBC），它可被電離成正、負離子：
MBC→methylene blue++chloride-
帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色。常用的堿性染料除美藍外，還有結晶紫（crystal violet）、堿性複紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱沙黃，safranine）等。
細菌體積小，較透明，如未經染色常不易識別，而經著色後，與背景形成鮮明的對比，使易於在顯微鏡下進行觀察。
二、器材
顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環，雙層瓶，擦鏡紙，生理鹽水；
呂氏堿性美藍染色液，石炭酸複紅染色液；
金黃色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌。
三、操作步驟
1．塗片 取兩塊幹淨的載玻片，各滴一小滴生理鹽水於載玻片中央，用無菌操作（圖Ⅳ-1，具體操作參照實驗一），分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌於二載玻片的水滴中（每一種菌製一片），調勻並塗成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，塗片必須均勻。
2．幹燥 於室溫中自然幹燥。
3．固定 塗片麵向上，於火焰上通過2—3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態，並使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細菌形態將毀壞。
4．染色 放標本於水平位置，滴加染色液於塗片薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏堿性美藍染色液約染2—3分鍾，石炭酸複紅染色液約染1—2分鍾。
5．水洗 染色時間到後，用自來水衝洗，直至衝下之水無色時為止。注意衝洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接衝在塗片處。衝洗後，將標本晾幹或用吹風機吹幹，待完全幹燥後才可置油鏡下觀察。
6．鏡檢
按實驗二操作程序進行顯微鏡觀察。
四、實驗報告
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