1範圍
本標準規定了致病性嗜水氣單胞菌的檢驗方法。
本標準適用於患病魚類等易感動物及水樣中致病性嗜水氣單胞菌的分離、鑒定,也可用於送檢菌株的鑒定。
2 致病性嗜水氣單胞菌檢驗程序
檢驗程序的流程示意圖見附錄C(提示的附錄)。
2.1 嗜水氣單胞菌的分離
2.1.1準備
2.1門.1各種培養的製備方法見附錄A(標準的附錄)。
2.1.1.2各種試劑的製備方法見附錄B(標準的附錄)
2.1.2 待檢樣本
待檢樣本可包括病料、水樣及送檢菌株,病料既可是無菌采取的易感動物的腎、肝、脾等未汙染病料,也可是糞便或病變皮膚等汙染病料,如樣本為菌株,應先接種於普通肉湯(見附錄A中A1),28℃培養24h,再劃線接種於普通瓊脂平板(見附錄A中A2),使之形成單個菌落,以供鑒定用。
2.3 分離
2.1.3.1未汙染病料的分離
2.1.3.1.1接種環(鉑金耳)火焰滅菌,冷卻。
2.13.1.2 用接種環蘸取病料
2.1.31.3劃線接種於普通瓊脂平板。
2.1.3.1.4 28℃培養24h。
2.13.2 汙染病料的分離
2.1.3.2.1接種環(鉑金耳)火焰滅菌,冷卻。
2.1.3.2.2用接種環蘸取病料。
2.1.3.2.3接種於RS瓊脂平板(見附錄A中A3),
2.1.3.2.4 28℃培養24h。
2.1.3.3 水樣的分離:
2.1.3.3.1用孔徑為0.2pm的硝酸纖維素微孔濾膜過濾水樣。
2.1.3.3.2取出濾膜,置含有滅菌堿性蛋白陳水(見附錄A中A4)的試管中。
2.1.3.3.3 28℃培養24h。
2.1.3.3.4劃線接種於普通瓊脂平板。
2.1.3.3.5 28℃培養24h。
2.2嗜水氣單胞菌的鑒定
2.2.1菌落形態
嗜水氣單胞菌在普通瓊脂平板上。28-C培養24h後的菌落為光滑、微凸、圓整、無色或淡黃色,有特殊芳香氣味
2.2.2 氧化酶試驗
2.2.2.1用鉑金耳挑取普通瓊脂平板上單個菌落少許。
2.2.2.2塗布於浸有1%鹽酸四甲基對苯胺(見附錄B中BI)的濾紙片上。
2.2.2.3 10s內觀察細菌塗布處的顏色。
2.2.2.4 若細菌塗布處出現紅色,判為陽性。
2.2.2.5嗜水氣單胞菌應為陽性。
2.2.3AHM鑒別培養
2.2.3.1用鉑金耳挑取普通瓊脂平板上氧化酶試驗陽性的單個菌落少許。
2.2-3.2 穿刺接種AHM鑒別培養基(見附錄A中A5)
2.2.3.3 37C培養24h。
2-2-3.4 嗜水氣單胞菌的表現為:頂部仍為紫色,底部為淡黃色;細菌沿穿刺線呈刷狀生長,即運動力陽性;部分菌株頂部呈黑色。
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