4鑒定
4.1篩選試驗
4.1.1每個瓊脂平板至少應挑選2個典型或可疑菌落,分別用接種針接種賴氨酸脫羧酶培養基或尿素酶瓊脂一管,接種後無須滅菌接種針,直接再接種三糖鐵瓊脂一管於37℃培養24±2h。
4.1.2 挑取菌落後的瓊脂平板,應置於4～8℃至少保留24 h,以備必要時複查。
4.1.3 按表2或表3結果進行判斷。
表2 三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羥酶培養基篩選
三 糖 鐵 瓊 脂 賴氨酸脫羧酶培養基 初步判斷
斜 麵 底 層 產 氣 硫化氫
K A ＋(－) ＋(－) + 可疑沙門氏菌屬
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙門氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) + 可疑沙門氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) - 非沙門氏菌屬
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙門氏菌屬
注: K—產堿; ＋—陽性反應; (－)—少見反應；A—產酸; －—陰性反應; ＋/－─陽性或陰性反應。
表3 三糖鐵瓊脂和尿素酶瓊脂篩選
三 糖 鐵 瓊 脂 尿素酶瓊脂 初步判斷
斜 麵 底 層 產 氣 硫化氫
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙門氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙門氏菌屬
K A ＋(－) ＋(－) + 非沙門氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) + 非沙門氏菌屬
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙門氏菌屬
注: K—產堿; ＋—陽性反應; (－)—少見反應；A—產酸; －—陰性反應; ＋/－─陽性或陰性反應。
4.2 生化試驗
4.2.1 將符合表2或表3可疑沙門氏菌屬特性的三糖鐵瓊脂培養物,按表4進行生化試驗 (表中賴氨酸脫羧酶試驗或尿素酶試驗的結果見4.1結果,不再另做)。
表4 沙門氏菌屬生化反應
序 號 生 化 項 目 反 應
沙門氏菌 亞利桑那菌
1 尿素酶試驗 - -
2 V-P試驗 - -
3 氰化鉀試驗 - -
4 賴氨酸脫羧酶試驗 + +
5 吲哚試驗 - -
6 丙二酸鈉試驗 - +
7 衛矛醇試驗 d -
注: ＋—陽性反應；－—陰性反應；d—反應不定。
4.2.2 所有生化試驗管均於37℃培養24±2 h。
4.2.3 生化試驗結果符合表4沙門氏菌屬特性的按4.3進行。
4.3 血清學試驗
4.3.1 檢查培養物有無自凝性
在潔淨的玻片上加一滴生理鹽水,將待試培養物混合於生理鹽水滴內,使成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動30～60 s,在黑色背景下觀察反應(最好用放大鏡觀察)。如菌體彼此相凝集成明顯或比較明顯小顆粒狀物,即認為有自凝性。反之無自凝性。
4.3.2 檢查“O”抗原
對無自凝性的培養物,按照4.3.1的程序進行試驗,但以多價“O”血清代替生理鹽水, 在2min內判斷結果。如為陽性結果以單價“O”血清進行分群試驗。如為陰性結果,必要時,可結合4.2結果按4.3.3進行試驗,再以多價和單價“O”血清進行試驗。
4.3.3 檢查“Vi”抗原
按照4.3.1的程序進行,但以“Vi”血清代替生理鹽水。
4.4 根據4.2和4.3試驗結果,按照表5進行判定。
表5 沙門氏菌屬生化試驗與血清學試驗結果判定
類別 生化試驗 血清學試驗 其他試驗 判定
1 符合表4中沙門氏菌生化特性 "O"因子血清分群陽性 沙門氏菌
2 符合表4中沙門氏菌生化特性 "O"因子血清分群陰性 菌落典型,
鏡檢革藍氏 沙門氏菌
陰性無芽胞杆菌
3 尿素酶試驗陽性 非沙門氏菌
4 尿素酶試驗陰性,表4生化反應 "O"因子血清分群陽性 沙門氏菌
3～5項中任一項不符合沙門氏菌
5 尿素酶試驗陰性,表4生化反應
2～5項中任一項不符合沙門氏菌 "O"因子血清分群陰性 非沙門氏菌
6 尿素酶試驗陰性,表4生化反應
2～5項中任二項或二項以上不符沙門氏菌 非沙門氏菌
7 符合表4中亞利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群陽性 亞利桑那菌
8符合表4中亞利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群陰性 菌落典型, 亞利桑那菌
鏡檢革藍氏
陰性無芽胞杆菌
9 尿素酶試驗陽性 非亞利桑那菌
10 尿素酶試驗陰性,表4生化反應 "O"因子血清分群陽性 亞利桑那菌
3～5項中任一項不符合亞利桑那菌
11 尿素酶試驗陰性,表4生化反應 "O"因子血清分群陰性 非亞利桑那菌
2～5項中任一項不符合亞利桑那菌
12 尿素酶試驗陰性,表4生化反應 非亞利桑那菌 2～5項中任二項或二項以上不符亞利桑那菌
注: ①丙二酸鈉試驗陰性,衛矛醇試驗反應不定的菌株,按上述1～6類別結果進行判斷。
②丙二酸鈉試驗陽性,衛矛醇試驗陰性的菌株,按上述7～12類別結果進行判斷。
③如以上生化項目仍不能判定時,可按P·R·愛德華,W·H·愛文:《腸杆菌科的鑒 定》(1978中譯本),擴大必要的生化試驗。結合血清學作綜合判定。
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