附錄 A 培養基和試劑的配製
A1 堿性蛋白腖水(APW)
蛋白腖 10.0g
氯化鈉 10.0g
蒸餾水 1 000mL
混勻後,調節pH值至(8.5±0.2),分裝225mL於250mL廣口瓶中,121℃高壓滅菌10min。
A2 TCBS瓊脂
酵母浸膏 5.0g
蛋白腖 10.0g
蔗 糖 20.0g
硫代硫酸鈉·5H2O 10.0g
檸檬酸鈉 ·2H2O 10.0g
牛膽酸鈉 3.0g
牛膽汁 5.0g
氯化鈉 10.0g
檸檬酸鐵 1.0g
溴麝香草酚藍 0.04g
麝香草酚藍 0.04g
瓊 脂 18.0g
蒸餾水 1 000mL
除指示劑外,將各種成分加熱溶解,調至pH8.6,加入指示劑。此培養基不必高壓滅菌,煮沸1~2min,分裝20mL於15mm×100mm平皿內。
A3 三糖鐵瓊脂(TSI)
牛肉浸膏 3.0g
蛋白腖 20.0g
乳 糖 10.0g
蔗 糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
硫酸亞鐵 0.5g
氯化鈉 30.0g
瓊 脂 12.0g
酚 紅 0.024g
除瓊脂和酚紅外,將其他成分用蒸餾水400mL微火加熱溶解,同時將瓊脂置於600mL蒸餾水中,浸泡數分鍾後,加熱煮沸使完全溶解。然後將以上兩液混合均勻。調至pH7.4, 加入指示劑混勻,分裝於15mm×150mm試管,每管3mL~4mL,115℃高壓滅菌15min。滅菌後擺成斜麵,使高層和斜麵各約3cm。
A4 雙糖鐵瓊脂(KIA)
牛肉浸膏 3.0g
酵母膏 3.0g
月示蛋白腖 15.0g
蛋白腖 5.0g
乳糖 5.0g
葡萄糖 1.0g
硫酸亞鐵 0.2g
氯化鈉 20.0g
硫代硫酸鈉 0.3g
瓊脂 12.0g
酚紅 0.024g
蒸餾水 1 000mL
將各成分溶解於蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱,煮沸約1min。最終pH(7.4±0.2)。分裝13mm×100mm試管,121℃高壓滅菌15min。放置高層斜麵備用。
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