7 報告結果 生化試驗符合副溶血性弧菌特性的菌株,按增菌培養陽性管數,應用表3(3管法),查出每100 g樣品中的副溶血性弧菌MPN值。檢驗結果報告為每100g樣品中副溶血性弧菌的最近似值為××個。
注:當報告每100g樣品中副溶血性弧菌的最近似值時,可將查表所得數字乘以100。
8、神奈川現象及血清學實驗(根據需要進行)
8.1 神奈川現象試驗
8.1.1 以接種環將30g/L氯化鈉胰腖水培養物點種於充分幹燥的我妻氏血瓊脂平板上。可先在平板背麵以玻璃鉛筆劃出若幹小區,使一個平板能做多個試驗。
8.1.2 37℃培養18～24h。
8.1.3 在24 h以內觀察結果,陽性結果在菌落周圍有一清晰的透明環。
8.2 血清學鑒定:副溶血性弧菌的抗原分為O、K、H三種。血清學分型以O及K抗原進行鑒定。
8.2.1 K 抗原凝集試驗
8.2.1.1 將經生化試驗證實為副溶血性弧菌的菌株轉種在兩支30g/L氯化鈉普通瓊脂斜麵上,37℃培養18 h。
8.2.1.2 以2mL 20g/L氯化鈉溶液洗下一支瓊脂斜麵培養物,製成濃厚菌懸液。
8.2.1.3 先以K多價抗血清與菌懸液進行玻片凝集試驗。在1min內觀察反應。陽性凝集者,另進行自然凝集試驗,若自然凝集試驗為陰性,再以該K多價抗血清中的單因子K抗血清進行試驗。
8.2.1.4 與單因子K抗血清出現陽性凝集的,為該菌株的相應K抗原。
8.2.2 O抗原凝集試驗
8.2.2.1 以20g/L氯化鈉〔含5％(V/V)甘油〕溶液洗另一支瓊脂斜麵培養物,將菌懸液經 121℃高壓滅菌1 h。
8.2.2.2 以離心沉澱法去上清液,再以20 g/L氯化鈉溶液4000r/min離心15 min,洗兩次沉澱後加0.5mL 2％氯化鈉溶液製成濃厚的菌懸液。
8.2.2.3 以已知K 抗原對應的O 群抗血清進行玻片凝集試驗,同時以20 g/L氯化鈉溶液代替抗血清做自然凝集對照試驗。
8.2.2.4 與抗血清出現強陽性凝集的,為該菌株的O抗原。
8.2.3 根據以上血清學試驗結果,可報告為發現副溶血性弧菌O×K×血清型。
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