附 錄 A 培養基和試劑的配製(補充件)
A1 胰(月示)-亞硫酸鹽-環絲氨酸(TSC)瓊脂
胰(月示) 15.0g
大豆腖 5.0g
酵母膏 5.0g
偏亞硫酸氫鈉[sodium bisulfite(meta)] 1.0g
檸檬酸鐵銨 1.0g
瓊脂 20.0g
加蒸餾水稀釋到1000mL，調至pH7.6±0.1，分裝到500mL燒瓶中，每瓶250mL。121℃高壓滅菌15min，倒平皿前，每250mL培養基(50℃)中，加過濾除菌的0.5％ D-環絲氨酸溶液20.0mL。
製作卵黃平板：加50％卵黃乳液20 mL到250 mL含D-環絲氨酸培養基中，傾注到無菌平皿中，每皿約15mL。使用前應將平皿置室溫使其幹燥。
A2 D-環絲氨酸溶液
溶解1gD-環絲氨酸於200 mL磷酸鹽緩衝液(c＝0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加熱)，經0.45μm濾膜過濾除菌。
A3 卵黃乳液
用硬刷刷洗鮮蛋，瀝幹，放70％乙醇中浸泡1h。以無菌操作取出蛋黃，加等體積無菌0.8％氯化鈉溶液，混合置4℃貯存。
A4 緩衝動力-硝酸鹽培養基
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
硝酸鉀 5.0g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 2.5g
半乳糖 5.0g
甘油 5.0g
瓊脂 3.0g
用蒸餾水溶解並稀釋到1000mL。調至pH7.3±0.1，分裝試管，每管11mL。121℃高壓滅菌15min。
A5 乳糖-明膠培養基
胰(月示) 15.0g
酵母膏 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 5.0g
酚紅 0.05g
明膠 120.0g
用蒸餾水溶解並稀釋到1000mL，調至pH7.5±0.1，加入乳糖和酚紅。分裝試管，每管10 mL。121℃高壓滅菌15min。
A6 產芽孢肉湯
多價腖(polypeptone) 15.0g
酵母膏 3.0g
可溶性澱粉 3.0g
硫酸鎂 0.1g
硫乙醇酸鈉 1.0g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 11.0g
用蒸餾水溶解稀釋到1000mL，調至pH7.8±0.1，分裝試管，每管15 mL。121℃高壓滅菌15min。
A7 多價蛋白腖-酵母膏(PY)培養基
多價腖 20.0g
酵母膏 5.0g
氯化鈉 5.0g
用蒸餾水溶解並稀釋到1000mL, 調至pH6.9±0.1, 分裝到帶螺帽的試管內,每管9mL。121℃高壓滅菌15 min。
A8 硫乙醇酸鹽液體培養基
胰酪腖 15.0g
L-胱氨酸 0.5g
氯化鈉 2.5g
葡萄糖 5.0g
酵母膏 5.0g
硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸) 0.5g
刃天青鈉溶液(1:1000)(新鮮配製) 1 mL
瓊脂 0.75g
將胱氨酸、氯化鈉、葡萄糖、酵母膏和胰腖同1000mL蒸餾水混合，並在阿諾氏消毒器或蒸氣浴中加熱，直至完全溶解，並加入硫乙醇酸鈉或硫乙醇酸溶液，使溶解。如必要可用1mol/L氫氧化鈉調整pH，使消毒後的pH在7.1±0.2，加刃天青鈉溶液，混合，將培養基分裝到150mm×16mm螺旋蓋試管內，每管10mL，121℃高壓滅菌20min。
A9 蛋白腖水
在2000 mL蒸餾水中溶解蛋白腖2.0g，調至pH7.0±0.1。在200 mL瓶中分裝90 mL，在500 mL錐形瓶中分裝225 mL。121℃高壓滅菌15min。
A10 亞硝酸鹽試劑
a．試劑甲 在1000mL 5mol/L乙酸中溶解對氨基苯磺酸8g；
b. 試劑乙 在1000mL 5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11 緩衝甘油-氯化鈉溶液
在900mL蒸餾水中溶解氯化鈉4.2g，加無水磷酸氫二鉀12.4g，無水磷酸二氫鉀4.0g和甘油100mL，混合，充分溶解。調至pH7.2。121℃高壓滅菌15min。
配製雙料緩衝甘油溶液(20％)時，用甘油200mL和蒸餾水800mL。
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