5 樣品的製備
5.1 以無菌操作用滅菌刀、剪將樣品剪碎。稱取50 g放於無菌均質杯中。
5.2 加450 mL無菌磷酸鹽緩衝稀釋液於均質杯中以18000～20000 r/min均質2min。製成1 : 10樣品稀釋液。
5.3 取1: 10稀釋液10.0 mL加到含有90.0 mL無菌磷酸鹽緩衝液的稀釋瓶中,充分混勻製成1 : 100的稀釋液。
5.4 每個稀釋度換用1支10.0mL滅菌吸管,按上述操作程序進行10倍遞增稀釋直至10**-6。6 檢驗步驟
6.1 平板計數法
6.1.1 取各稀釋液0.1mL接種到MYP瓊脂平板上。用滅菌L形玻璃棒均勻塗布於整個瓊脂表麵。每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。
6.1.2 將平板置於30℃培養24 h。
6.1.3 選取具有15～150個典型或可疑蠟樣芽孢杆菌菌落的平板,進行計數。並計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數。
蠟樣芽孢杆菌在MYP瓊脂平板上生成的菌落為微粉紅色,環繞產生卵磷脂酶沉澱環。如反應不典型,可繼續培養24h再計數。
6.1.4 計數後,從每個平板至少選取5個已計數的菌落分別接種於營養瓊脂斜麵,於30℃培養24 h,按第6章進行證實試驗。
6.1.5 根據證實試驗確定為蠟樣芽孢杆菌的菌落數,按比例計算出該皿內的蠟樣芽孢杆菌菌落數,然後乘其稀釋倍數再乘以10,即得每克樣品所含蠟樣芽孢杆菌數並作出報告。例:將檢樣10**-4稀釋液0.1mL塗布於MYP瓊脂平板上,生成的可疑菌落數為25個,取5個進行鑒定,證實為蠟樣芽孢杆菌的是4個,則1 g樣品中蠟樣芽孢杆菌數為(25×4/5)×10**4×10＝2×10**6。
6.2 最近似值(MPN)法
適用於汙染蠟樣芽孢杆菌數不大於10**3個/g的食品。
6.2.1 選用三管法MPN係列。取10**-1、10**-2、10**-3三種稀釋液,每種稀釋液接種3管胰酪腖大豆多粘菌素肉湯,每管接種1mL。
6.2.2 置於30℃培養48±2 h。
6.2.3 從長菌的試管取培養物劃線接種到MYP瓊脂平板上。
6.2.4 置30℃培養24～48 h。
6.2.5 從MYP瓊脂平板上挑取粉紅色繞有沉澱環的單個菌落,接種營養瓊脂斜麵,置30℃培養24 h,供作證實試驗。
6.2.6 根據證實試驗確定為蠟樣芽孢杆菌的管數,由MPN表 [附錄C(補充件)]計算蠟樣芽孢杆菌的MPN值/g,並作出報告。
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