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出口畜產品中炭疽杆菌檢驗方法——3



錄入時間:2008-12-18 15:41:04 來源:青島betway必威西汉姆联生物

A5 洗樣液
吐溫-20 2.5mL
蒸餾水 1 000mL
將吐溫-20加於蒸餾水中,充分攪勻,分裝於三角燒瓶或試劑瓶內,121℃高壓滅菌。貯存於 0~4℃冰箱,備用。
A6 生理鹽水
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000.00mL
待氯化鈉完全溶解後,分裝於三角燒瓶或試劑瓶內,121℃高壓滅菌 20min。
A7 緩衝生理鹽水
無水磷酸氫二鈉 1.42 g
氯化鈉 8.50 g
蒸餾水 1 000.00 mL
將各成分加於蒸餾水中,加熱攪拌使完全溶解。如欲長期保存,可加 0.1g硫柳汞(最終濃度為 0.01%)。
A8 固定液
無水乙醇 600 mL
三氯甲烷 300 mL
甲醛溶液(36%~38%) 100 mL
將三種成分混勻,貯存於磨砂口帶蓋試劑瓶內。
A9 炭疽杆菌噬菌體γ或 ω型的均可使用。
A10 革蘭氏染色液及染色方法
A10.1 Hucker 氏結晶紫液
A液:結晶紫(或龍膽紫) 2.0g 
     乙醇(95%) 20.0mL
B液:草酸銨 0.8g
     蒸餾水 80.0 mL
將 A、B兩液混勻,放置 24 h後,用粗濾紙過濾。貯於磨砂口滴瓶內。 
A10.2 革蘭氏碘液碘 1.0 g碘化鉀 2.0 g蒸餾水 300.0 mL 將碘和碘化鉀放於乳缽內,研成細粉。先後分三次分別加蒸餾水1mL 、5mL和10 mL,繼續研磨至完全溶解,倒入褐色瓶中。再加水將殘留於乳缽的碘液洗入瓶中,補加蒸餾水至300mL。
A10.3 脫色劑95%乙醇 適量貯於磨砂口滴瓶中。
A10.4 Hucker氏複染液(貯備液)沙黃 O 2.5 g乙醇(95%) 100mL臨用時,取適量貯備液,加蒸餾水稀釋成 1:10稀釋液。
A10.5 染色方法
a. 於載玻片上製備塗膜,自然幹燥;
b. 將玻片浸入固定液內,固定 1 min;
c. 加結晶紫於塗膜上,染色 1 min;
d. 用水衝去染色液,淋去多餘的水; 
e. 加革蘭氏碘液於塗膜上,媒染 1 min;
f. 用水衝去碘液;
g. 連續加 95%乙醇流過塗膜,至無紫色脫掉;
h. 用水衝洗玻片,淋去多餘的水;
i. 加複染液於塗膜上,染色 10~30 s;
j. 用水衝去染色液;
k. 用吸墨紙吸幹水分或自然幹燥;
l. 鏡檢。
A11 大豆凝集素稀釋液按試劑使用說明製備工作稀釋液,貯於 4℃冰箱備用。
附加說明:本標準由中華人民共和國進出口商品檢驗局提出。本標準由中華人民共和國內蒙古進出口商品檢驗局負責起草。本標準主要起草人甄宏太、周雲霞
中華人民共和國國家進出口商品檢驗局 1994-12-26批準 1995-05-01實施   
   

 

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