出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法
中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準SN 0172-92
代替 ZB X09 003-86Method for detection of staphylococcusaureus in food for export
1 主題內容與適用範圍
本標準規定了出口食品中金黃色葡萄球菌的檢驗方法。
本標準適用於出口食品的檢驗。
2 設備和材料
2.1 供常規平板計數用的基本設備與材料。
2.2 L形玻璃棒。
3 培養基和試劑
3.1 普通肉湯培養基。
3.2 胰蛋白腖大豆肉湯。
3.3 Baird-Parker培養基。
3.4 甲苯胺藍-DNA瓊脂。
3.5 生理鹽水。
3.6 凝固酶試驗兔血漿。
4 樣品製備
4.1 固體或半固體食品: 以無菌操作稱取25g樣品,放入裝有225mL滅菌生理鹽水的滅菌均質杯內,於8000r/min均質1～2min,製成1:10樣品勻液。
4.2 液體食品: 用滅菌吸管吸取25mL樣品,放入裝有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠),經充分振搖製成1:10樣品勻液。
4.3 供計數檢驗時,可按十進位遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。
5 檢驗步驟
5.1 最近似值(MPN)測定法 適用於檢測認為帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經處理的食品中的少量金黃色葡萄球菌。
5.1.1 選三個連續稀釋度,從每個稀釋度分別取1 mL稀釋樣品液,接種3管含10％氯化鈉胰蛋白腖大豆肉湯。樣品的最高稀釋度必須達到能獲得陰性終點,置36±1℃培養48 h。 5.1.2 用3 mm接種環,從有細菌生長的各管中移取1 環,劃線接種於表麵幹燥的Baird-Parker瓊脂平板,置36±1℃培養45～48h。
5.1.3 從有細菌生長的每一平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌菌落[見附錄B(參考件)],移種到肉湯培養基中,置36±1℃培養20～24 h。
5.1.4 取肉湯培養物0.3mL同0.5mL凝固酶試驗兔血漿於8mm×100mm試管內充分混合,置36±1℃培養,定時觀察是否有凝塊形成,至少觀察6 h,以內容物完全凝固,使試管倒置或傾斜時不流動者為陽性。試驗中需同時做巳知陽性和陰性對照。對可疑結果,應進行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗{如耐熱核酸酶試驗[見附錄C (補充件)]等} 加以證實。
5.1.5 報告結果
根據凝固酶試驗結果查最近似值(MPN)表 [見附錄D (補充件)],報告金黃色葡萄球菌的MPN/g (mL)。
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