5.1.3.4接種器材5.1.3.4.1小口塑料瓶(20L )5.1.3.4.2 Mallasez或修改的Neubauer血球計數器。 所有玻璃器皿和塑料管都必須在使用後及洗滌前經高壓消毒。用熱的濃洗滌劑溶液清潔器材,然後將它們放到濃度最小為509 / L的次氯酸鈉溶液中,至少在室溫浸泡30 min。用蒸餾水衝洗器材,然後將其放到沒有卵囊的環境中幹燥。盡可能使用一次性物品。5.1.3.5試劑5.1.3.5.1超純水5.1.3.5.2 15Ommol/lPBS溶液(磷酸緩衝鹽)A成分: NaCL 8.5g Na2HPO4 1.079 Na2HPO4.2H2O 0.39g加超純水到1000ml B製法:用鹽酸或氫氧化鈉將pH調到7.2士0.1,在4℃ 可儲存1個星期
5.1.3.5.3賈第鞭毛蟲/隱袍子蟲免疫磁分離(IMS)試劑盒A抗隱抱子蟲單克隆抗體磁微粒;B抗賈第鞭毛蟲單克隆抗體磁微粒;C 10SL緩衝液A (15mL),透明無色;D 10SL-M緩衝液B(loml),品紅色。將免疫磁分離(IMS)試劑盒,4℃ 儲存。5.1.3.5.4免疫熒光試劑盒抗隱抱子蟲/賈第鞭毛蟲單克隆抗體一異硫氰酸鹽熒光素試劑盒(5mL ),於4℃ 儲存
5.1.3.5.5封固劑:2%DABCO/甘油。A成分:甘油/PBS緩衝鹽溶液(60%/40%) 100 mL DABCO 2gB保存:室溫條件下儲存12個月。5.1.3.5.6 1mol/LTris , pH7.4 在1000 mL超純水中溶解132.29的TriS鹽酸;然後再加19.49的TriS堿。用鹽酸或氫氧化鈉溶液將pH調到7.4士0.1。用孔徑0.2um的濾膜將它過濾滅菌後,移到一個無菌的塑料容器中室溫條件下儲存6個月。5.1.3.5.7 0.5mol/lNa2—EDTA , pH8.0。將37.22g乙二胺四乙酸二鈉鹽二水化合物(Na2一EDTA)溶解到200 mL的超純水中,然後用鹽酸或氫氧化鈉溶液將pH調到8.0士0.1,室溫條件下儲存6個月。5.1.3.5.8淘洗緩衝液。A Envirochek淘洗緩衝液:月桂醇聚醚12 ( Laureth一12 ) 4g 1mol/lTris , pH7.4 4Oml 0.5mol/l Na2一EDTA , pH8.0 8 mL A型止泡劑 600ul 加超純水到4000mL 稱取1g月桂醇聚醚12到玻璃燒杯中,然後加100 mL超純水。用電爐或微波爐將燒杯加熱,使月桂醇聚醚一論溶解,然後再將其轉移到1 000 ml有刻度的量筒中。用超純水將燒杯衝洗幾次,確保所有的洗滌劑都轉移到量筒中。加10mLpH為7.4的TriS溶液;2mLpH為8.0的Na2一EDTA溶液和150ulA型止泡劑最後用超純水稀釋到1000mL。室溫條件下儲存l個月。 B FiltaMax淘洗緩衝液(PBST緩衝液): Na2HPO4 1.44g KH2PO4 0.24g KCl 0.2g NaCI 8g非離子表麵活性劑Tween-20 0.1mL超純水 900mL將1.44g磷酸氫二鈉、O.24g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀及89氯化鈉加人900mL超純水,攪拌20 min至完全溶解,加人0.lm工非離子表麵活性劑Tween20並繼續攪拌10min,然後用超純水稀釋至1 000 ml.。C、FiltaMaxPress決速法淘洗緩衝液(PETT緩衝液):焦磷酸四鈉 0.29EDTA檸檬酸三鈉 0.39 Tris一HCI (1mol/l) 10 mL Tween8O 0.1 mL將0.2g焦磷酸四鈉和0.3gEDTA檸檬酸三鈉加人900ml,超純水,攪拌10min使之完全混合。然後加人10 mL 1.0mol/L TrisHCI並攪拌5min使之混合。再加人0.1 ml Tweenso並攪拌10min混合(Tween80粘度高,吸取時務必注意)。最後用超純水稀釋至1000mL,並調節pH至7.4士0.2 5.1.3.5.9 0.1mol/l鹽酸溶液。5.1.3.5.10 lmol/L氫氧化鈉溶液5.1.3.5.11 純甲醇。5.1.3.5.12 DAPJ儲存溶液:在一個含有1mg4,6一二氨基一2苯基引噪(DAPI)的燒瓶中,注人500川的純甲醇(2mg/l)。4℃ 暗處儲存15天。5.1.3.5.13 DAPI染色溶液:用50mLPBS稀釋10ulDAPI母液每日配製並將它儲存在暗的4℃環境中。5.1.3.5.14 50g/L的次氯酸鈉溶液。5.1.3.5.15 堿勝洗滌劑5.13.5.16 純的Giar山alalnbl血抱囊:濃度為100個袍囊/ml,能在4℃ 儲存2個月。
5.1.3.5.17 純的Cryptoporidium paruuum卵囊:濃度為100個卵囊/mL,能在4℃ 儲存2個月
注:對於儲存了2個月以上的卵囊存儲液.可以在對其濃度和熒光的強度檢查之後繼續使用
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