3.1多管發酵法3.1.1範圍本標準規定了用多管發酵法測定生活飲用水及其水源水中的耐熱大腸菌群。本法適用於生活飲用水及其水源水中耐熱大腸菌群的測定。3.1.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準3.1.2.1耐熱大腸菌群thermotolerant coliform bacteria用提高培養溫度的方法將自然環境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區分開，在44.5℃ 仍能生長的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。3.1.3培養基與試劑3.1.3.1 EC培養墓3.1.3.1.11成分： A 胰蛋白脈 20g B 乳糖 5g C 3號膽鹽或提合膽鹽〕 1.5g D 磷酸氫二鉀 4g
E 磷酸二氫鉀 1.5g F 氯化鈉 5g G 蒸餾水 1000mL3.1.3.1.2製法：將上述成分溶解於蒸餾水中，分裝到帶有倒管的試管中，68.95 kPa (l15℃，10lb）高壓滅菌20min，最終pH為6.9士0.23.1.3.2伊紅美藍瓊脂同2.1.3.33.1.4儀器3.1.4.1恒溫水浴：44.5℃ 士0.5℃ 或隔水式恒溫培養箱。3.1.4.2其他同總大腸菌群多管發酵法（2.1.4.1——2.1.4.9 )3.1.5檢驗步驟3.1.5.1自總大腸菌群乳糖發酵試驗中的陽性管（產酸產氣）中取1滴轉種於EC培養基中．置44.5℃ 水浴箱或隔水式恒溫培養箱內（水浴箱的水麵應高於試管中培養基液麵），培養24h士2h，如所有管均不產氣，則可報告為陰性，如有產氣者，則轉種於伊紅美藍瓊脂平板上，置44.5℃ 培養18h—24h，凡平板L有典型菌落者，則證實為耐熱大腸菌群陽性3.1.5.2如檢測未經氯化消毒的水，且隻想檢測耐熱大腸菌群時，或調查水源水的耐熱大腸菌群汙染時，可用直接多管耐熱大腸菌群方法，即在第一步乳糖發酵試驗時按總大腸菌群2.1.5工接種乳糖蛋白陳培養液在44.5℃ 士0.5℃ 水浴中培養，以下步驟同3.1.5.1。3.1.6結果報告根據證實為耐熱大腸菌群的陽性管數，查最可能數（MPN）檢索表，報告每100 mL水樣中耐熱大腸菌群的最可能數（MPN）值。3.2濾膜法3.2.1範圍本標準規定了用濾膜法測定生活飲用水及低濁度水源水中的耐熱大腸菌群本法適用於生活飲用水及低濁度水源水中耐熱大腸菌群的測定3.2.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準。3.2.2.1 耐熱大腸菌群濾膜法mcmbrane filter technique for thermotolerant colifl甘nl bacteria耐熱大腸菌群濾膜法是指用孔徑為0.45um的濾膜過濾水樣，細菌被阻留在膜上，將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養基上，44.5℃ 培養24h能形成特征性菌落以此來檢測水中耐熱大腸菌群的方法3.2.3培養基與試荊3.2.3.1 MFC培養基3.2.3.1.1成分 A 胰陳 10g B 多陳 5g C 酵母浸膏 3g D 氯化鈉 5g E 乳糖 12.5g F 3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g
G 瓊脂 15g H 苯胺藍 0.2g I 蒸餾水 1000ml
3.2.3.1.2製法 在l000mL蒸餾水中先加人玫紅酸（10g/l）的0.2mol/L氫氧化鈉溶液10mL，混勻後，取500mL加人瓊脂煮沸溶解，於另外500ml蒸餾水中，加人除苯胺藍以外的其他試劑，加熱溶解，倒人已溶解的瓊脂，混勻調pH為7.4，加人苯胺藍煮沸，迅速離開熱源，待冷卻至60℃左右，製成平板，不可高壓滅菌。
製好的培養基應存放於2℃ ～10℃ ，不超過96h。 本培養基也可不加瓊脂，製成液體培養基使用時加2mL——3mL於滅菌吸收墊上，再將濾膜置於培養墊上培養3.2.3.2 EC培養基同3.1.3.13.2.4儀器3.2.4.1隔水式恒溫培養箱或恒溫水浴3.2.4.2玻璃或塑料培養皿：60mm*15mm或50mm*12mm。3.2.4.3其他儀器同2.2.43.2.5檢驗步驟3.2.5.1準備工作同2.2.5.1。3.2.5.2過濾水樣同2.2.5.2。3.2.5.3培養：水樣濾完後，再抽氣約5s，關仁濾器閥門，取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在MFC培養基上，濾膜截留細菌麵向上，濾膜應與培養基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然後將平皿倒置，放人44.5℃ 隔水式培養箱內培養24h士2h。如使用恒溫水浴，則需用塑料平皿，將皿蓋緊，或用防水膠帶貼封每個平皿，將培養皿成疊封人塑料袋內，浸到44.5℃ 恒溫水浴裏，培養24h士2h耐熱大腸菌群在此培養基上菌落為藍色，非耐熱大腸菌群菌落為灰色至奶油色。3.2.5.4對可疑菌落轉種EC培養基，44.5℃ 培養24h士2h，如產氣則證實為耐熱大腸菌群
3.2.6結果報告 計數被證實的耐熱大腸菌落數，水中耐熱大腸菌群數係以100ml，水樣中耐熱大腸菌群菌落形成單位（CFU）表示，見式（2）。
耐熱大腸菌菌落數（CFU/100ml）=所計得的耐熱大腸菌菌落數*100/過濾的水樣體積（mL )
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