2.3酶底物法2.3.1範圍本標準規定了用酶底物法測定生活飲用水及其水源水中的總大腸菌群。本法適用於生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的檢測。本法可在24h判斷水樣中是否含有總大腸菌群及含有的總大腸菌群的最可能數（MPN）。本法可同時檢測大腸埃希氏菌，見大腸埃希氏菌檢測（4.3）。2.3.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準。2.3.2.1 總大腸菌群酶底物法enzym : sub , trate technique for total coliforms 總大腸菌群酶底物法是指在選擇性培養基上能產生價半乳糖昔酶的細菌群組，該細菌群組能分解色原底物釋放出色原體使培養基呈現顏色變化，以此技術來檢測水中總大腸菌群的方法
2.3.3培養基與試荊2.3.3.1培養基 在本標準中酶底物法采用固定底物技術，本方法采用( MMO一MUG）培養基，可選用市售商品化製品。每1000mlMMO一MUG培養基所含基本成分為： A硫酸銨 5.0g B硫酸錳 0.5 rng C硫酸鋅 0.5 mg D硫酸鎂 100 mg E氯化鈉 10g F氯化鈣 50mg G亞硫酸鈉 40mg H兩性黴素B 1mg 1鄰硝基苯件-β-D-毗喃半乳糖普（ONPG ) 500mg J4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸普（MUG ) 75mg K茄屬植物萃取物（solanium萃取物） 500mg L N-2-乙基呱嗓NZ乙磺酸鈉鹽（HEPES鈉鹽） 5.3g M N-2-乙纂呱嗦NZ乙磺酸（HEPEs ) 6.9g 2.3.3.2生理鹽水 8.5g/l的生理鹽水，用於稀釋樣品成分：
氯化鈉 8.5g蒸餾水加至1000mL 溶解後．分裝到稀釋瓶內，每瓶90mL , 103.43kPa ( 121℃, 15lb) 20min高壓滅菌
2.3.4儀器設備2.3.4.1量筒：100ml、500ml、l000ml。2.3.4.2吸管：lml、5ml及10ml的無菌玻璃吸管或塑料一次性吸管2.3.4.3稀釋瓶：100ml、250ml、500mL及1O00ml能耐高壓的滅菌玻璃瓶2.3.4.4試管：可高壓滅菌的玻璃或塑料試管，大小約15mm*10cm。2.3.4.5培養箱：36℃ 士1℃ 。2.3.4.6高壓蒸汽滅菌器。2.3.4.7於熱滅菌器（烤箱）。2.3.4.8定量盤：定量培養用無菌塑料盤，含51個孔穴，每一孔穴可容納2ml水樣。
2.3.4.9程控定量封口機：用於51孔或97孔法（MPN法，最可能數法）定量盤的封口。
2.3.5檢驗步驟2.3.5.1水樣稀釋 檢測所需水樣為100mL若水樣汙染嚴重，可對水樣進行稀釋。取10mL水樣加人到90ml滅菌生理鹽水中，必要時可加大稀釋度。2.3.5.2定性反應 用100ml的無菌稀釋瓶量取100mL水樣，加入2.7g士0.5gMMO—MUG培養基粉末，混搖均勻使之完全溶解後，放人36℃士1℃ 的培養箱內培養24h。2.3.5.3 10管法2.3.5.3.1用100ml的無菌稀釋瓶量取100mL水樣，加人2.79士0.5gMMO—MUG培養基粉末，混搖均勻使之完全溶解2.3.5.3.2準備10支15mm*10cm或適當大小的滅菌試管，用無菌吸管分別從前述稀釋瓶中吸取10ml水樣至各試管中，放人36℃ 士1℃ 的培養箱中培養24h。2.3.5.4 51孔定量盤法2.3.5.4.1用100ml的無菌稀釋瓶量取100mL水樣，加人2.7g士0.5gMMO一MUG培養基粉末，混搖均勻使之完全溶解。2.3.5.4.2將前述100 ml水樣全部倒人51孔無菌定量盤內，以手撫平定量盤背麵以趕除孔穴內氣泡，然後用程控定量封口機封口。放入36℃士1℃ 的培養箱中培養24h。
2.3.6結果報告2.3.6.1結果判讀 將水樣培養24h後進行結果判讀，如果結果為可疑陽性，可延長培養時間到28h進行結果判讀，超過28h之後出現的顏色反應不作為陽性結果。2.3.6.2定性反應 水樣經24h培養之後如果顏色變成黃色，判斷為陽性反應，表示水中含有總大腸菌群。水樣顏色未發生變化，判斷為陰性反應定性反應結果以總大腸菌群檢出或未檢出報告2.3.6.3 10管法2.3.6.3.1將培養24h之後的試管取出觀察，如果試管內水樣變成黃色則表示該試管含有總大腸菌群。2.3.6.3.2計算有黃色反應的試管數，對照表4查出其代表的總大腸菌群最可能數（MPN）。結果以MPN/100 mL表示。如所有管未產生黃色，則可報告為總大腸菌群未檢出。
2.3.6.4 51孔定量盤法2.3.6.4.1將培養24h之後的定量盤取出觀察，如果孔穴內的水樣變成黃色則表示該孔穴中含有總大腸菌群。
2.3.6.4.2計算有黃色反應的孔穴數，對照表5查出其代表的總大腸菌群最可能數（MPN）。結果以ml表示。如所有孔未產生黃色，則可報告為總大腸菌群未檢出。
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