中華人民共和國國家標準 生活飲用水標準檢驗方法微生物指標
Standard examination methods for drinking water一Microbiolo隻ical parameters
2、總大腸菌群
2.1多管發酵法2.1.1範圍本標準規定了用多管發酵法測定生活飲用水及其水源水中的總大腸菌群。本法適用於生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的測定。2.1.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準2.1.2.1總大腸菌群total coljforms總大腸菌群指一群在37℃ 培養2h能發酵乳搪、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱杆菌2.1.3培養基與試荊2.1.3.1門乳糖蛋白膝培養液2.1.3.1.1成分 A 蛋白陳 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化鈉 5g E 嗅甲酚紫乙醇溶液（16g/L) 1mL F 蒸餾水 1000ml2.1.3.1.2製法將蛋白陳、牛肉膏、乳糖及氯化鈉溶於蒸餾水中，調整pH為7.2——7.4，再加人1 ml 16g/l的澳甲酚紫乙醇溶液，充分混勻，分裝於裝有倒管的試管中，68.95kPa (115℃，10lb）高壓滅菌20min，貯存於冷暗處備用2.1.3.2二倍濃縮乳糖蛋白膝培養液按上述乳糖蛋白陳培養液〔2.1.3.1)，除蒸餾水外，其他成分量加倍。2.1.3.3伊紅美藍培養基2.1.3.3.1成分 A 蛋白陳 10g
B 乳糖 10g
C 磷酸氫二鉀 2g D 瓊脂 20g一30g E 蒸餾水 l000ml F 伊紅水溶液（20g/l) 20ml
G 美藍水溶液（5g/L) 13ml 2.1.3.3.2製法 將蛋白陳、磷酸鹽和瓊脂溶解於蒸餾水中，校正pH為7.2，加人乳糖，混勻後分裝，以68.95kPa (115℃ ，10lb）高壓滅菌20min。臨用時加熱融化瓊脂，冷至50℃ ～55℃ ，加入伊紅和美藍溶液，混勻，傾注平皿。2.1.3.4革蘭氏染色液2.1.3.4.1結晶紫染色液A成分： a 結晶紫 1g b 乙醇（95%，體積分數） 20mL c 草酸錢水溶液（10g/l） 80mLB製法：將結晶紫溶於乙醇中，然後與草酸餒溶液混合。注：結晶紫不可用龍膽紫代替，前者是純品，後者不是單一成分，易出現假陽性結晶紫溶液放置過久會產生沉澱，不能再用。2.1.3.4.2革蘭氏碘液A成分： a 碘 1g b 碘化鉀 2g
c 蒸餾水 300 mlB製法：將碘和碘化鉀先進行混合，加人蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水。
2.1.3.4.3脫色劑乙醇（95%，體積分數）。2.1.3.4.4沙黃複染液A成分： a 沙黃 0.25g b 乙醇（95沉，體積分數） 10ml c 蒸餾水 90mLB製法：將沙黃溶解於乙醇中，待完全溶解後加人蒸餾水2.1.3.4.5染色法A將培養18h一24h的培養物塗片。B將塗片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。C滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。D滴加脫色劑，搖動玻片，直至無紫色脫落為止，約30s，水洗E滴加複染劑，複染1min，水洗，待幹，鏡檢。2.1.4儀器2.1.4.1培養箱：36℃ 士1℃ 。2.1.4.2冰箱：0℃ ～4℃ 。2.1.4.3天平2.1.4.4顯微鏡。2.1.4.5平皿：直徑為9cm。2.1.4.6試管2.1.4.7分度吸管：1mL , 10mL。
2.1.4.8錐形瓶2.1.4.9小倒管。2.1.4.10載玻片2.1.5檢驗步驟2.1.5.1乳糖發酵試驗2.1.5.1.1取10ml水樣接種到10ml雙料乳糖蛋白陳培養液中，取lml水樣接種到10mL單料乳糖蛋白陳培養液中，另取1mL水樣注入到9mL滅菌生理鹽水中，混勻後吸取1ml（即0.1ml水樣）注入到10ml單料乳糖蛋白陳培養液中，每一稀釋度接種5管 對已處理過的出廠自來水，需經常檢驗或每天檢驗一次的，可直接種5份10 mL水樣雙料培養基，每份接種10ml水樣2.1.5.1.2檢驗水源水時，如汙染較嚴重，應加大稀釋度，可接種1，0.1，0.0lmL甚至0.1 ,0.01 ,0.001 ml，每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時，必須作10倍遞增稀釋後，取1mL接種．每遞增稀釋一次，換用1支1 mL滅菌刻度吸管。2.1.5.1.3將接種管置36℃ 士l℃ 培養箱內，培養24h士2h，如所有乳糖蛋白膝培養管都不產氣產酸，則可報告為總大腸菌群陰性，如有產酸產氣者，則按下列步驟進行。2.1.5.2分離培養 將產酸產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，於36℃ 土1℃ 培養箱內培養18h——24h，觀察菌落形態，挑取符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色、中心較深的菌落2.1.5.3證實試驗經上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽抱杆菌，同時接種乳糖蛋白豚培養液，置36℃ 士1℃培養箱中培養24h士2h，有產酸產氣者，即證實有總大腸菌群存在2.1.6結果報告 根據證實為總大腸菌群陽性的管數，查MPN ( most Probable number，最可能數）檢索表，報告每l00ml水樣中的總大腸菌群最可能數（MPN）值。烏管法結果見表2.15管法結果見表3稀釋樣品查表後所得結果應乘稀釋倍數。如所有乳糖發酵管均陰性時，可報告總大腸菌群未檢出。
表2 用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合時的最可能數（MPN )
5個10ml管中陽性管數 最可能數（MPN）
0 < 2.2
1 2.2
2 5.1
3 9.2
4 16.0
5 >16
2.2濾膜法2.2.1範圍本標準規定了用濾膜法測定生活飲用水及其水源水中的總大腸菌群本法適用於生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的測定2.2.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準。2.2.2.1總大腸菌群濾膜法membrane rilter technique ror total coliforms總大腸菌群濾膜法是指用孔徑為0.45um的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在添加乳糖的選擇隆培養基上37℃培養24h，能形成特征性菌落的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞杆菌以檢測水中總大腸菌群的方法。
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