1、範圍本標準規定了副溶血性弧菌檢驗方法。本標準適用於動物隆水產幹製品、醃醉製生食動物性水產品、即食藻類食品、魚糜製品等水產食品和水產調味品以及食物中毒樣品中副溶血性弧菌的檢驗。2、規範性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨後所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用於本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用於本標準．GB / T 4789 . 28一2。。3食品衛生微生物學檢驗染色法、培養基和試劑3、設備和材料3.1冰箱：O℃ ～4℃ 。3.2恒溫培養箱：36℃ 士1℃ 。3.3顯微鏡：lo*——100*。3.4均質器或滅菌乳缽。3.5架盤藥物天平：0g——5009，精確至0.59。3.6滅菌試管：16mm*160mm，15mm*100mm及相應的試管架。3.7滅菌刻度吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、5ml、10mL（具0.1ml刻度）。3.8滅菌錐形瓶：500 mL、20ml。3.9滅菌玻璃珠：直徑約5mm。3.10滅菌培養皿：90 mm。3.11 1mL注射器。3.12接種燈和接種環．3.13滅菌手術剪、鑷子等。3.14小白鼠：12g一15g。4培養基和試劑4.1氯化鈉結晶紫增菌液：按GB/丁4789.28一2003中4.39規定。4.2氯化鈉蔗糖瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.40規定。4.3嗜鹽菌選擇性瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.41規定。4.4 3.5％氯化鈉三糖鐵瓊脂：按GB/T4了89.28一2003的中4.42規定。4.5氯化鈉血瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.43規定。4.6嗜鹽性試驗培養基：按GB/T 4789.28一2003中4.44規定．4.7 3.5％氯化鈉生化試驗培養基：按GB/T 4789.28一2003中4.45規定。4.8革蘭氏染色液：按GB/T 4789.25一2003中2.2規定。4.9甲基紅試劑：按GB/T 4789.28一2003中3.4規定。
4.10靛基質試劑：按GB/T 4789.28一2003中3.13規定。
4.1 IV一P試劑：按GB / T 4789 . 28一2003中3 . 4規定。
5、檢驗程序（略）
6、操作步驟6.1 分離培養：以無菌操作取檢樣25g( mL )，加225mL 3.5％滅菌鹽水，用均質器打碎或用乳缽磨碎，接種氯化鈉瓊脂平板和嗜鹽菌選擇性瓊脂平板各一個，同時取10mL，加人100mL增菌液中，置37℃8h—16h培養後，塗上述平板進行分離，於37℃ 18h～24h培養後取出觀察。6.2 挑取上述可疑菌落，轉種3.5％氯化鈉三糖鐵斜麵，37℃、24h觀察結果。6.3 塗片鏡檢：將三糖鐵培養基反應可疑者（底層變黃葡萄糖產酸不產氣，斜麵不變乳糖蔗糖不分解，有動力，不產生硫化氫）進行塗片革蘭氏染色鏡檢形態6.4 嗜鹽性試驗：將上述可疑培養物分別接種於不同濃度的鹽膝水中，37℃ 24h培養後觀察生長情況，在無鹽和10％以上鹽的陳水中不生長，在7％鹽的煉水中生長良好者進行下列有關試驗。
6.5生化試驗：分別接種各類生化培養基．置37℃ ，除V-P、靛基質、甲基紅試驗培養48h後加試劑觀察外，其他均可在以h觀察。
表1副溶血性弧菌的生化學性狀
葡萄糖產酸＋ V-P —葡萄糖產氣＋ 靛基質—蔗糖一 賴氨酸 +乳糖一 鳥氨酸 +/—甘露純十 精氨酸 —硫化氫一 溶血 +/—甲基紅＋
注：+陽性；一陰性；+／一多數陽性，少數陰性。
7、動物實驗
將上述各類反應的副溶血性弧菌接種3.5%氯化鈉腖水，經37℃16—18h培養後，小鼠腹腔注射0.3ml，觀察2—3d，將死亡小鼠進行解剖並做分離培養。
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