1 主題內容與適用範圍
本標準規定了食品中溶血性鏈球菌的檢驗方法。
本標準適用於食品和食物中毒樣品中溶血性鏈球的檢驗。
2 引用標準
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 設備和材料
3．1 溫箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 顯微鏡。
3．4 離心機。
3．5 試管架。
3．6 滅菌平皿。
3．7 滅菌小試管。
3．8 載玻片。
3．9 滅菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 滅菌鑷子。
3．11 均質器。
3．12 酒精燈。
3．13 接種環。
4 培養基和試劑
4．1 葡萄糖肉浸液肉湯：按GB 4789.28 中4.1 規定，在肉浸液肉湯內加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉湯：按GB 4789.28 中4.1 規定。
4．3 匹克氏肉湯：按GB 4789.28 中4.62 規定。
4．4 血瓊脂平板：按GB 4789.28 中4.6 規定。
4．5 人血漿。
4．6 0.25%氯化鈣。
4．7 滅菌生理鹽水。
4．8 杆菌肽藥敏紙片（含 0.04 單位）。
5 檢驗程序
6 操作步驟
6．1 樣品處理
稱取 25 g 固體檢樣；稱取25 mL 液體檢樣，加入 225 mL 滅菌生理鹽水，
研成勻漿製成混懸液。
6．2 一般培養
將上述混懸液吸取 5 mL，接種於 50 mL 葡萄糖肉浸液肉湯；或直接劃線接
種於血平板，如檢樣汙染嚴重，可同時按上述量接種匹克氏肉湯，經 36±1℃培
養 24 h，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，然後觀察溶血
情況及革蘭氏染色，並進行鏈激酶試驗及杆菌肽敏感試驗。
6．3 形態與染色
本菌呈球形或卵圓形，直徑 0.5～1 μm，鏈狀排列，鏈長短不一，短者4～8
個細胞組成，長者 20～30 個，鏈的長短常與細菌的種類及生長環境有關；液體
培養中易呈長鏈；在固體培養基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運動。
6．4 培養特性
該菌營養要求較高，在普通培養基上生長不良，在加有血液、血清培養基中
生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉澱。血平板
上菌落為灰白色，半透明或不透明，表麵光滑，有乳光，直徑約0.5～0.75 mm，
為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌周圍有2～4 mm 界限分明、無色透明的
溶血圈。
6．5 鏈激酶試驗
致病性乙型溶血性鏈球菌能產生鏈激酶（即溶纖維蛋白酶），此酶能激活正
常人體血液中的血漿蛋白酶原，使成血漿蛋白酶，而後溶解纖維蛋白。
吸取草酸鉀血漿0.2 mL，加 0.8 mL 滅菌生理鹽水，混勻，再加入 18～24 h36
±1℃培養的鏈球菌培養物0.5 mL 及 0.25%氯化鈣0.25 mL（如氯化鈣已潮解，
可適當加大至 0.3%～0.35%），振蕩搖勻，置於 36±1℃水浴中 10 min，血漿混
合物自行凝固（凝固程序至試管倒置，內容物不流動）。然後觀察凝塊重新完全
溶解的時間，完全溶解為陽性，如 24 h 後不溶解即為陰性。
草酸鉀人血漿配製：草酸鉀 0.01 g放入滅菌小試管中，再加入 5 mL人血，
混勻，經離心沉澱，吸取上清液即為草酸鉀人血漿。
6．6 杆菌肽敏感試驗
挑取乙型溶血性鏈球菌液，塗布於血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有 0.04
單位的杆菌肽紙片，放於上述平板上，於 36±1℃培養 18～24 h，如有抑菌帶出
現即為陽性。同時用已知陽性菌株作為對照。
上一篇：動物病原微生物菌（毒）種保藏管理辦法
下一篇：中華人民共和國國家標準食品衛生微生物學檢驗蠟樣芽胞杆菌檢驗
