由於衣原體缺乏代謝酶，致使它在無生命的培養液上不能生長，隻能使用細胞培養才能進行該病原體的分離。
【材料】
1、McCOY細胞。
2、衣原體標本運送培養液、細胞生長培養液，磷酸鹽緩衝液（PBS），放線菌酮（一種抗代謝藥物，可以抑製真核細胞代謝而不抑製原核細胞生長繁殖，從而有利於衣原體繁殖）。
3、平底細胞培養瓶，吸管、毛細吸管。
【方法】
1、標本的采集和運送標本中必需含有上皮細胞，因為衣原體是在細胞內增殖。含1ml運送培養液的小試管內放有23顆無菌小玻璃珠。采集標本的拭子放入試管內，將患者標本洗到運送培養液中，拭子經滅菌處理後適當處理。小試管用冰壺帶回實驗室。將試管置震蕩器上，猛烈震蕩20秒，使感染細胞破碎，釋放出原體。可立即接種或置-70ssd2冰箱保存，接種時快速融化。
2、製備單層McCOY細胞管：McCOY細胞在組織培養瓶中生成致密單層，經0.25%胰酶消化後，加入細胞生長液，配成約含100000細胞/ml的細胞懸液，吸取1ml分裝於細胞培養小瓶中，瓶底預先置一約12mm*12mm的蓋玻片，在二氧化碳培養箱中37℃培養24—48小時，使細胞在蓋玻片上形成單層。
3、接種標本取已生長好的McCOY細胞管，吸去上清，每管加入1ml細胞生長液及0.2ml處理的標本液，2000—3000r/min離心1小時，促使衣原體進入細胞，然後置5%二氧化碳溫箱中1—2小時。吸去上清，加入含1ug/ml放線菌酮的營養液，置37℃ 5%二氧化碳培養箱中培養48小時。
4、取出蓋玻片，用PBS洗2—3次，風幹，用無水甲醇固定後，用於碘染色（包涵體呈棕褐色）或姬姆薩染色，或用丙酮固定後用熒光抗體染色，結果觀察同前所述。
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