鉤端螺旋體可以進行人工培養，但其生長要求較高，需用含8%—10%兔血清的Korthof培養液，血清在其中所起的作用，一方麵是提供鉤端螺旋體生長所需的生長因子，另一方麵可以中和鉤端螺旋體的代謝產物，有利於鉤端螺旋體的生長。
【材料】Korthof培養液，待檢標本（患者血液、尿液或可疑動物的內髒）
【方法】
1、患者血液培養采集早期患者血液，無菌操作接種於2—3管Korthof培養管中，每管接種1—3滴。血培養管置28℃培養。每隔5—7天取培養物暗視野顯微鏡下觀察有無鉤端螺旋體生長，若有生長，即為分離陽性。若未見生長，需繼續培養60天，仍不見鉤端螺旋體方作陰性處理。
2、患者尿液培養：留取病後兩周以上的患者中段尿30—50ml於無菌離心管中3500—4000r/min離心1小時。取沉渣0.3—0.5ml接種於2—4管上述培養液中，28℃孵育。每隔5—7天取材鏡檢。為提高檢出率和減少汙染，可在采集尿標本的前一天晚上給患者服用碳酸氫鈉2—4g，同時，在培養液中加入100—400ug/ml5-氟尿嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。
3、動物腎髒培養無菌操作，采集新鮮動物腎髒（包膜完整），剪取米粒大小接種於2—3管Korthof培養管中，置28℃培養。每隔5—7天取培養物置暗視野顯微鏡下觀察有無鉤端螺旋體生長，若有生長，即為分離陽性。若未見生長，需繼續培養60天，仍不見鉤端螺旋體生長方作陰性處理。
4、菌株分群、分型應用分群血清與新分離的鉤端螺旋體作凝集實驗，確定菌群。應用交叉凝集素吸收實驗或分型因子血清來確定菌型。
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