1、準備自冰箱中取出試劑後，應置室溫平衡20—30分鍾使用。
2、配洗滌液以蒸餾水稀釋濃縮洗滌液即可。
3、稀釋標本在小試管內加稀釋液100ul、再加蒸餾水400ul混勻，作為應用稀釋液。加被檢血清5ul（1：100）；尿和腦脊液不經稀釋而直接加50ul入孔內；胸腹水取25ul於0.5ml應用稀釋液中（1：20稀釋，血性胸、腹水作1;10稀釋即可）混勻。
4、加樣本分別吸取稀釋樣本50ul於酶標條孔內，並設臨界和陽性對照各1孔，分別加入臨界血清、陽性血清50ul，37℃水浴10分鍾，洗滌液洗滌3次，每次1分鍾，於吸水紙上拍幹。
5、加酶結合物每孔加酶標記抗體應用液1滴，置37℃水浴1分鍾，洗滌液衝洗6次，每次1分鍾，於吸水紙上拍幹。
6、加底物及終止反應每孔加底物I1滴、底物II1滴，37℃水浴1分鍾，每孔再加終止液1滴終止反應，混勻後判斷結果。
【結果】
1、抗體-lgM的檢測加終止液後，以空白對照孔校零，在波長450nm處讀取各孔的吸光值（A），凡A值>陰性對照孔均數的2倍的樣品孔，即為陽性。
2、抗體-lgM的檢測
目測法：呈現藍色深於臨界孔者為陽性，可按呈色深淺判定（+）——（+ + + +）表示陽性程度（陽性對照孔為+ +）。
比色法：每孔加終止液終止後用450nm波長進行比色計算，報告單位數。
測定單位=測定孔OD值 *100/臨界孔OD值 （>100單位者為陽性）
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