雖然正常人的尿液是無菌的，但由於肛門與尿道口相隔很近，所以尿標本極易受到糞便中細菌的汙染。另外，正常人外尿道有正常菌群如大腸埃希菌、葡萄球菌等存在，該菌又是尿道感染常見的病原菌。為了鑒別尿中細菌是汙染菌還是泌尿係感染病原菌，有必要對尿中細菌數量進行測定，以作出正確的評價。本實驗介紹尿標本中細菌的定量培養法。
【材料】
1、無菌離心管。
2、普通瓊脂平板或營養瓊脂平板。
3、離心機。
4、無菌0.9%氯化鈉溶液
【操作】
一、標本的采集
要做好細菌學檢查，首先應注意標本的采集。其關鍵環節是要求嚴格的無菌操作，其次，任何方法采集標本都應嚴格遵守在用藥前進行並盡快送檢。尿液標本的采集同樣要遵循這些原則。尿液標本采集方法如下：
1、中段尿采集法
女性：用肥皂水清洗外陰部後，再用清潔水衝洗，用無菌棉球或紗布擦幹，將陰唇分開排尿，將前段棄去10—20ml，留中段尿5—10ml於一滅菌瓶內。
男性：用肥皂水清洗尿道口後再用清水衝洗，留中段尿。包皮過長者應將包皮翻開衝洗。
2、腎盂尿采集法為確定尿中細菌是否來自腎髒，可用導尿管采集腎盂尿。充分衝洗膀胱，以最後一次衝洗尿作對照，後用導尿管插入輸尿管，分別標記左右側，收集3次尿液·
二、定量培養法
1、定量接種環法將尿液充分混勻後，用經過校正的定量（0.001ml/環）接種環取尿液1環，在瓊脂平板上作均勻塗布，然後置於37℃培養18—24h小時，計數菌落。
2、微量可調移液器法將尿液充分混勻後，以無菌0.95氯化鈉溶液將尿液作10倍係列稀釋，用經過校正的微量可調移液器吸取尿液100ul置平板上，迅速以滅菌L型玻棒將尿液均勻鋪開，然後將平板以底在下、蓋在上的方式置桌麵上10分鍾以使尿液被平板充分吸收後，再將平板倒置於37℃溫箱培養18—24h小時，計數菌落。按下麵公式計算每毫升尿液中的細菌數，計數的原則同水衛生細菌學檢查中細菌總數的檢驗：
每毫升尿液的菌數=平板上菌落數*稀釋倍數/接種尿（ml）
三、報告方式及意義
直接報告每毫升尿液中的細菌數。如定量接種環含量為0.001ml，平板上菌落為100個，則每毫升尿液內所含的細菌數為100000個。
尿液細菌培養陽性時，必須根據細菌數判斷是否有泌尿係統感染。檢出同一種細菌時，革蘭陰性杆菌>100000CFU/ml時可認為是病原菌，有人認為進行一次尿液細菌定量培養，若菌數在100000CFU/ml以上，準確率為80%，兩次檢 出同一細菌在100000CFU/ml以上，準確率為91%，三次檢 出同一種菌且菌數在100000CFU/ml，則其準確率達95%；尿液細菌含量在10000-100000CFU/ml之間時為可疑，應重複檢查；<10000CFU/ml時可視為汙染；若檢出革蘭陽性球菌，則以每毫升尿液中>10000CFU/ml視為病原菌。在嚴格無菌手續下送檢膀胱穿刺或導尿之尿液進行培養時，無論菌數多少，均應視作病原菌。如輸尿管尿菌數比對照尿菌數多、或第3次尿比第1次尿菌數多，則該菌可能夠來自腎髒。
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