在細菌的血清鑒定中,最常使用的方法是凝集反應,其基本原理是細菌為顆粒性抗原,當與相應的抗體混合時,在一定濃度的電解質條件下,可出現肉眼可見的凝集現象。
玻片法凝集實驗是用診斷血清在玻片上與待測細菌相混合,在電解質存在下,若出現肉眼可見的凝集小塊即為陽性,表示該菌為所用抗體的相應細菌。此法是一種定性實驗,方法簡便快速,特異性強。可用於鑒定菌種及菌型。用於鑒定細菌的診斷血清有以下幾種:
1、多價診斷血清:即混合診斷血清。該血清含有兩種(或型)以上細菌的相應抗體。一般用於細菌定群或初步分型。
2、單價診斷血清僅含一種(或型)細菌的相應抗體。可用於細菌的定種(或型)。
3、因子診斷血清細菌含有多種抗原成分,而且不同菌群細菌之間可有共同的抗原成分。因此,通過凝集吸收實驗,將抗血清中的共同抗體除掉,僅含一種特異性抗體的診斷血清稱為因子血清。可用於細菌分型。
【材料】
1、菌種豬霍亂沙門菌。
2、診斷血清沙門菌A-E多價血清,定群的6個O群因子血清(A群-O2、B群-O4、C1群-O7、C2群-08、D群-09、E群-03、10),定型的H因子血清。
3、其他:0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
【操作】
1、取一潔淨載玻片,用記號筆劃兩個1—1.5cm的圓圈。
2、取1:5或1:10診斷血清一接種環置於玻片左側圈內,在右側圈內放一接種環0.9%氯化鈉作為對照。如天氣炎熱,環境溫度高,則應適當多取血清及0.9%氯化鈉,以防試劑短時間內幹涸,影響結果的觀察。
3、用接種環取待鑒定的新鮮細菌少許,分別研磨乳化於診斷血清及0.9%氯化鈉內使之均勻混合。旋轉搖動玻片數次,1—3分鍾後觀察結果。
按上述操作方法,依次分別做A-E多價血清定屬,特異性O因子血清定群,H因子血清定型(或種)。
【結果】
陰性:對照側及實驗側均勻混濁不出現凝集。
陽性:鹽水對照側呈現均勻混濁,實驗側明顯凝集。
自凝:對照側及實驗側均出現凝集。
臨床標本的檢測,常常還需要加作一個陽性對照。觀察結果時,先觀察陰性對照及陽性對照,兩個對照結果均符合實驗設計時,再觀察實驗孔。
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