由於腸道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌,其與腸道致病菌的主要區別之一是:大多數條件致病菌可分解乳糖,而絕大多數腸道致病菌則不分解乳糖。故分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養液(如麥康凱瓊脂等)以及對大腸埃希菌等條件致病菌有較強抑製作用、而又有利於腸道某些致病菌(如沙門菌及誌賀菌屬)生長繁殖的強選擇性鑒別培養液。
本實驗主要介紹疑為沙門菌或誌賀菌屬感染者或帶菌者的糞便標本(或直腸拭子)中致病菌的分離和鑒定。
【材料】
1、盛有糞便標本(或肛拭子)的無菌試管(作教學實驗時可考慮使用傷寒沙門菌或痢疾誌賀菌屬與大腸埃希菌的混合菌作為模擬標本)。
2、四硫磺酸鹽(TT)增菌液、革蘭陰性杆菌(GN)增菌液。
3、麥康凱和SS瓊脂平板、雙糖培養液。
4、各種生化反應培養液及試劑(可參見微生物的 自動分析及附錄)。
5、沙門菌多價“O”(A-F組)及單價“O”診斷血清、“H”因子診斷血清。
6、誌賀菌屬多價及單價診斷血清。
【操作】
一、標本采集
由於糞便中細菌種類很多,故應根據檢查目的的不同選擇適宜的培養液或用適當方法處理,盡可能地抑製雜菌,以利於病原菌的檢出。同時,采集標本時應注意以下幾點:
1、不能認為糞便中細菌含量多,糞便標本的采集就無須無菌操作。糞便標本的采集也應遵循無菌操作的原則。若便器或標本容器不潔而汙染了變形杆菌,就可能影響病原菌的分離檢出,甚至把汙染菌誤報,造成誤診。
2、采樣的時期應合適。疑似痢疾患者應在發病初期、用藥前采取標本。糞便標本采集時應挑取無尿液汙染的有膿血、黏液部分的糞便2—3g(液狀糞便可挑取絮狀物),盛於無菌容器內送檢。在無法獲得糞便時,可采用直腸拭子,即用滅菌棉拭子經0.9%氯化鈉溶液或增菌培養液濕潤後,插入肛門內)4—5cm處,輕輕轉動一圈後取出,插入無菌試管或保存液中送檢;疑似傷寒患者應在發病2—3周內采集糞便標本。
3、糞便標本如不能立即送檢,可將標本放入甘油鹽水保存液中,或保存於冰箱內(勿超過2小時)。
二、檢查程序
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