凝膠法是通過在有內毒素存在的情況下利用鱟試劑產生凝集反應來檢測或定量內毒素的方法。在標準環境中,能夠使鱟試劑產生凝集的內毒素的最低濃度即為鱟試劑的標示靈敏度。
1、試驗前的準備工作與材料
試驗所用器皿需經處理除去可能存在的外源性內毒素(常用的方法是250℃幹烤至少1h,也可用其他適宜的方法)。同時試驗所用器皿應確保不幹擾細菌內毒素的檢查;試驗操作過程應防止微生物的汙染。材料與器具:①細菌內毒素工作標準品;②鱟試劑;③細菌內毒素檢查用水;④旋渦混合器和37℃士1℃試管恒溫儀;⑤10mm*75mm試管或複溶後的0.1ml/支規格的鱟試劑原安瓿;⑥稀釋容器(大口徑試管、小三角瓶、小磨口瓶、抗生素瓶或安瓿);⑦移液器材(1、2、5、0.5移液管或移液槍);⑧試管架或試管浮板;⑨其他用具:酒精燈、消毒酒精棉球、剪刀、砂輪、鑷子、封口膠布、油性筆、標記紙。
2、鱟試劑靈敏度複核:當使用新一批鱟試劑或試驗環境中發生了可能會影響檢驗結果的改變時,須進行鱟試劑靈敏度複核試驗。
根據鱟試劑靈敏度的標示值,將細菌內毒素國家標準品或細菌內毒素工作標準品用細菌 內毒素檢查用水溶解,在旋渦混合器上混合15min,然後製成2.0入、入、0.5入和0.252等4個濃度的內毒素標準溶液,每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30s,取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10mm*75mm試管或複溶後的0.1ml/支規格的鱟試劑原安瓿,等體積加入內毒素標準溶液。每一個濃度平行做4管,同時在2管中加入0.1ml細菌內毒素檢查用水作為陰性對照。將試管 中溶液輕輕混勻後,封閉管口,垂直放入37士1℃適宜恒溫器中,保溫60士2min。 將試管從恒溫器中輕輕取出,緩緩倒轉180℃時,管內凝膠不變形,不從管壁滑脫者為陽性,記錄為(+);凝膠不能保持完整並從管壁滑脫者為陰性,記錄為(-)。保溫和拿取試管過程應避免受到振動造成假陰性結果。
若最大濃度2.0入管均為陽性,最低濃度0.25入管均為陰性,陰性對照管為陰性時,試驗方為有效。按式計算反應中點濃度的幾何平均值,即為鱟試劑靈敏度的測定值(入c)。
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