（三）培養基製備應注意事項
1、常用玻璃儀器的準備
製備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水衝洗幹淨，晾幹後備用。
（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內，於121℃高壓蒸汽菌3min後烘幹，備用。
（2）試管管口用棉花塞或矽氟塑料試管塞塞好，再用布或報紙包紮好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘幹，備用。
（3）吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端（防止汙染物吸出，或橡皮帽內的氣體汙染），然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內，於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘幹，備用。其他玻璃器皿均應按上法處理，也應裝金屬筒內160℃幹熱滅菌2h後，備用。
2、培養基的製備及儲存
（1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時應經常攪拌，防止焦結，待其溶解後補足水分。
在使用幹燥培養基時，先將蒸餾水按定量加入容器中，然後稱取一定量培養基幹粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振蕩，或延長時間以促進溶解，一般不要熱，必要時加熱，但時間不宜過長，溫度不宜過高，避免某些營養成分被破壞。
（2）校正酸堿度（調節pH）：培養基必須有適當的pH。因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一，測定pH的標準溫度為25士2℃。調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩衝液的pH時，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低，一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右，滅菌後基本合適。因此對培養基、緩衝液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定，並記下每次pH的測定結果，有助於積累數據考察每種培養基、緩衝液、試劑對滅菌程序的耐受性，從而指導滅菌前pH的調節。幹燥培養基一般已校正過pH，用時也必須再驗證。測定時，一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化，或用pH計校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或堿液加以校正。調整pH後要加熱過濾，使培養基澄清。
（3）培養基的分裝：大批量配製時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前後，均要對分配器的管道係統進行衝洗，在分裝無菌培養基前，則要采用無菌矽膠管。
固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管。
平皿：傾注平皿，應在無菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。
斜麵：製備低層斜麵分裝於試管，約占容積1/5，滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木杆上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基，如沾有培養基應用布抹去，以避免汙染。
高層斜麵：製備高層斜麵分裝於試管，約占試管容積的1/3，滅菌後趁熱放置成高層短斜麵，待其凝固後應用。
分裝好的培養基或緩衝液等及時密封後必須在配製當天（2h內最佳）進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基，滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中。
培養基的滅菌：培養基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌，各種培養基的滅菌時間和壓力，按其成分不同而定。普通培養基采用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時，應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續3d，間歇滅菌。血清或組織液，采用低熱56—58水浴1h，連續5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等，可用細菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內的空氣，再逐漸升壓保持預定的壓力和時間，達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認，如不同類型培養基混合一起滅菌時宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
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