菌體很小，有多形性，屬原核cell微生物
分為三個屬：立克次體屬、羅卡利馬體屬、柯克斯體屬
第一節 概述
一、形態與結構
菌體較小，Q熱 ˜最小，可通過濾菌器
多形性
G-，不易著色， Giemsa染色，兩極濃染
二、代謝與繁殖
三、抵抗力
Q熱˜>普氏˜>莫氏˜>斑點群>恙蟲病˜
四、抗原結構：
五、遺傳與變異：
Q熱˜有I和II兩個相， Ag能變易
六、致病性
第二節 立克次體的檢驗方法
一、立克次體的分離
（一）動物接種
（二）雞胚卵黃囊培養法
二、血清學試驗：
（一）外斐文氏反應：Q熱，立克次體痘，戰壕熱，不能用外斐氏反應檢測
無法區分普氏和莫氏立克次體
對複發的斑疹傷寒，輕症斑疹傷寒，15%接種疫苗後感染無法區分
（二）補體結合試驗：
（三）間接血凝試驗
第三節 引起人類感染的主要立克次體
一、普氏和斑疹傷寒立克次體
可用豚鼠接種區別 普氏 à流行性斑疹傷寒 莫氏à地方性斑
診傷寒
血清學試驗
二、恙蟲病立克次體
三、伯納特氏柯克斯體
PCR
在DNA聚合酶作用下
一、sPCR的原理
是一般段特異性DNA片段在體外合成的酶促反應
PCR技術的本質是體外酶促合成特異性DNA片段的一種方法。類似於體內的cell分裂中半保留複製過程。首先用
加熱的方法使DNA解鏈成兩股單鏈（這步也叫變性），用降溫的辦法使兩股單鏈按堿基在補的原則分別與加入的
人工合成的寡核苷酸鏈結合（這步叫做複性）。人工合成的寡核苷酸鏈很短，隻有15-20bp，起引導作用，又稱
作引物。在反應體係DNA聚合酶作用下使反應體係中遊離的單核苷酸，沿引物上端，按bp配對的規則延伸（這
步叫延伸），形成兩條與模板DNA在補的半保留複製鏈。重複上述這種變性，複性（退失），延伸過程，可獲得
更多的半保留複製鏈。新合成的鏈又可成為下次循環的模板，Q PCR以指數方式增加，經30次左右循環，可將所
需基因擴大到幾百萬倍。
一般PCR擴增倍數=（1+c）n
長引物片斷（非特異性）以算術級數增加，短引物片斷（特異物）以幾何級數增加，Q可忽略
二、特點
1、靈敏度高 pgàug
2、特異性強 取決於引物與模板結合的正確性 耐熱DAN聚合酶（Tage）
3、操作簡便
4、省時
三、設備和試劑
1、微量離心管 管壁薄 傳熱快
微量加樣器和吸頭 2套 50-200μL 1-2μL
小型台式高速離心機10000r/min
DNA擴增代
電泳儀
紫外燈
2、試劑：高純度的水（經過高壓滅菌的雙蒸水）
4種dNTP 0.2mmoL/L
10倍緩衝液（100 mmoL /L TrisHcL、500 mmoL /L KCD 、
5 mmoL /L Mgd2、1%GeL）
載樣緩衝液（蔗糖40%，溴酚藍 3maL/L NaAc 10%sos
100mg/mL蛋白EK）
電泳緩衝液（0.089md/LTris HcL 硼酸EDTA.2Na 2mmoL/L）
Tag酶 -20C保存 0.5 單位/ μL
EB（澳化乙啶） 使DAN增色
液體石蠟
四、3反應體係：組成
3核酸模板 DNTP TagE kcL Tris HcL緩衝液 Mad2引物
（一）注意事項：
原始材料中不能含蛋白酶、核酸酶，TagE抑製劑，能與DNA結合的pro
（二）引物
引物長度控製在15-30bp之內 G+C<50moL%
bp排列隨機，避免5個以上嘌呤堿成嘧啶堿連續排列
避免引物內部出現二級結構
避免引物間互補性，特別是3¢端（引物=聚體）
引物的特異性 計算機進行同源性分析
每種引物濃度0.25 μmol/L
（三）四種核苷酸
每種0.2 μmol/L 濃度過高，易致延伸時，bp配對發生錯誤 Þ50-200μmoL/L
濃度過低，產物量¯ 不能低於10-15μmoL/L
四種濃度要均等
[dNTp]，易與Mg2+結合 [Mg2+]，TagE活性¯
（四）TagE ：
100μL反應體係 2-2.5單位/ mL
（五）Mg2+
1.5mmoL/ L [Mg2+] 特異性¯
[Mg2+]¯ TagE活性¯ ，產物量¯
（六）PCR反應所需的陽離子—K+ 、Mg2+
50 mmoL/ L 濃度 >75mmoL/ L TagE活性¯
（七）Tris HcL緩衝液
10 mmoL/ L
（八）Gel
對TagE活性起保護作用
（九）循環參數
溫度，時間，周期數
五、PCR的汙染
來源：標本間的交叉汙染
擴增產物對後續擴增的汙染—主要汙染
實驗室環境及操作者攜帶造成的汙染
克服方法：分區
專用儀器、設備、試劑
進入擴增區和電泳區的物品不能進入通過區和試劑準備區
試劑小份分裝，開封前可離心
使帶纖維濾塞的槍頭，一次性使用
勤換手套，加樣宜緩勿急
每次做陰、陽性對照
汙染後用稀HcL擦拭或紫外燈照射，Q可使DNA降體
用duTP取代dTTP 100μL體係加1個單元尿苷酶，可消
除擴增產物汙染
解鏈溫度可使尿苷酶失活，不影響
後續擴增
六、結果分析
瓊脂糖凝膠電泳
DNA探針、標記、顯色
排除假陰、陽性
七、標本處理：
cell裂解，DNA釋放
其他物質的去除：¬去汙劑+蛋白酶的消解方法
去汙劑 裂解生物膜
蛋白酶K 使蛋白失活
加熱 使蛋白酶K失活
加熱或強堿裂解
®其他 包被磁珠等有表麵活性物質吸收DNA，去除雜質
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