真菌的一般檢驗法為直接鏡檢觀察是否有菌絲、孢子或菌體,檢出循環抗原等。直接鏡檢對真菌病診斷很重要,尤其對威脅生命的真菌病,快速、準確的非培養診斷法是非常必要的。
不染色標本直接鏡檢除部分深部感染真菌可初步確定菌種外,大部分淺部感染真菌僅能確定真菌菌絲和有無孢子,很難確定為何種真菌感染。
1、材料
①標本。甲屑、皮屑、毛發等固體標本;膿汁、尿沉渣、分泌物等液體標本。
②試劑。100g/lNaOH或KOH溶液;生理鹽水。
③其他。小鑷子、蓋玻片、載玻片。
方法
(1)製片方法將甲屑、皮屑、毛發等 固體標本置滅菌潔淨載玻片上,加一滴封固劑(100g/lNaOH或KOH溶液),蓋上蓋玻片,微加熱使角質軟化,輕壓蓋玻片,使標本變薄、透明,並驅除氣泡。膿汁、尿沉渣、分泌物等標本僅用無菌生理鹽水稀釋即可。
(2)檢驗方法:先用低倍顯微鏡檢查,當查到可疑為真菌孢子或菌絲時,再換高倍鏡檢查,觀察記錄菌絲和孢子。許多標本不需染色即可直接鏡檢。如觀察分生孢子的發育需放大1000倍。有些結構如分生孢子梗上產生的瓶梗需用相差顯微鏡才看得清楚。某些病原性真菌如莢膜組織胞漿菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌感染病人標本中,直接檢出與這些病原菌形態特征符合的真菌時,結合臨床表現容易作出明確診斷。如果檢出的是正常菌群,要確定其病原性比較困難。在酸中毒的糖尿病病人暴發急性感染時,如檢出寬或波形不分隔的菌絲則應考慮毛黴菌病。直接檢出的結果也有助於實驗室進一步診斷,有助於采取恰當的檢驗步驟和措施(如選擇特殊的培養基和確定適宜的孵育時間)。但是,直接檢查也有其局限性,因為陰性結果也不能排除真菌感染,直接檢查不如培養法敏感,其敏感性也隨標本類型、數量、采集時間和質量等而有不同;也有假陽性結果,溶解的淋巴細胞在腦脊液印度墨汁濕片中易誤認為新型隱球菌;脂肪微滴也可能與出芽酵母細胞混淆。出現可疑結果時應進行複查,或采用其他檢驗步驟。除花斑癬病原菌培養有困難隻能依據直接鏡檢診斷外,一般標本應進一步作培養檢查。
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