(1)實驗原理:流感病毒表麵的血凝素能與人的“O”型紅細胞、豚鼠和雞的紅細胞上的血凝素受體結合,引起紅細胞凝集。
(2)實驗材料
①流感病毒的尿囊腔培養液或羊膜腔的羊水培養液。
②病人血清、0.5%雞紅細胞懸液。
③流感病毒型與亞型免疫血清。
④試管架、無菌小試管、無菌生理鹽水、毛細滴管。
(3)實驗方法
①取小試管9支,第1管加生理鹽水0.1ml,其他各管均加0.5ml。
②取收獲的尿囊液0.1ml,加入第1管中作1:10稀釋,混勻後吸取0.5ml(1:10稀釋)加至第2管混勻,混勻後從第2管中吸取0.5ml置第3管混勻……依次作倍比稀釋至第8管,混勻後從第8管中取出0.5ml棄去。這樣各管的液體量均為0.5ml,從第1管至第8管的尿液稀釋度為1:10,1:20…1:1280,第9管為生理鹽水對照管。
③稀釋完畢後每管加入0.5%雞紅細胞懸液0.5ml. 混勻,室溫放置30—45min,立即觀察結果,觀察時輕拿、勿搖。
(4)結果判定各管出現雞紅細胞凝集程度 以“++++”、“+++”、“++”、“+”、“—”表示,以出現“++”病毒的最高稀釋度為血凝效價。
++++:雞紅細胞全部凝集成塊狀,凝集的紅細胞鋪滿管底。
+++:大部分雞紅細胞凝集,在管底鋪成薄膜狀,但有少數紅細胞不凝,在管底中心形成小紅點。
++ :約有半數雞紅細胞凝集,在管底鋪成薄膜,麵積較小,不凝集的紅細胞在管底中心形成小圓點。
+:隻有少數雞紅細胞凝集,不凝集的紅細胞在管底聚成小圓點,凝集的紅細胞在小圓點周圍。
—:不凝集。雞紅細胞沉於管底,呈一邊緣整齊的致密圓點。
按上述結果舉例的流感病毒的血凝效價為1:320,即病毒液稀釋至1:320時,每0.5ml中含1個血凝單位。若配4個血凝單位,病毒液應稀釋成1:80。
如果血凝試驗陽性,應該進一步做血凝抑製試驗鑒定該病毒的型甚至亞型。
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