(1)黑斯莢膜染色法
①在莢膜菌塗片上(在空氣中 自然幹燥,無需加熱固定)放一小塊濾紙片,之後滴加結晶紫染液。
②在火焰上微微加熱,使玻片上染液 冒蒸汽為止。
③用200g/l硫酸銅水溶液衝洗染液,切勿用流水衝洗。用吸水紙吸幹後油鏡檢查。
結果:菌體呈紫色,莢膜呈淡紫色或無色。
(2)密爾莢膜染色法
①製片。常規法製片,幹後加熱固定。
②染色。加石炭酸複紅液。微加熱染1min,水洗。
③媒染。加特殊媒染劑,作用0.5min,水洗。
④複染。加堿性美藍液,染1min,水洗。
⑤鏡檢。幹後油鏡檢查。
結果:菌體呈鮮紅色,莢膜呈藍色。
(3)奧爾特莢膜染色法塗片、自然幹燥、火焰 固定後滴加染液,經火焰加溫使染液產生蒸汽後,繼續染3min,水洗,待幹,鏡檢。
結果:菌體呈赤褐色,莢膜呈黃色。
(4)濕墨水負染法
①加一滴墨水於潔淨的載玻片上,然後挑取少量菌體與其混合均勻。
②將一潔淨蓋玻片蓋在混合液上,然後在蓋玻片上放一張濾紙,輕輕按壓以吸去多餘的混合液。加蓋玻片時勿產生氣泡,以免影響觀察。
③高倍鏡或油鏡檢查。
結果:背景灰色,菌體較暗,在菌體周圍呈現明亮的透明圈。
(5)幹墨水負染法
①加一滴60g/l葡萄糖液於潔淨載玻片的一端,然後挑取少量菌體與其混合,再加一環墨水,充分混勻。
②另取一端邊緣光滑的載玻片作推片,將推片一端的邊緣置於混合液前方,然後稍向後拉,當推片與混合液接觸後,輕輕左右移動,使之沿推片接觸的後緣散開,爾後以大約30°角迅速將混合液推 向玻片另一端,使混合液鋪成薄層。
③空氣中自然幹燥 。
④用甲醇浸沒塗片固定1min,棄去 甲醇。
⑤在酒精燈上方用文火幹燥 。
⑥用甲基紫染1—2min。
⑦用自來水輕輕衝洗,自然幹燥 。
⑧高倍鏡或油鏡檢查。
結果:背景灰色,菌體紫色,菌體周圍為清晰透明的莢膜。
(6)石炭酸複紅液染色法
①取培養了72h的莢膜菌製成塗片,自然幹燥(不可用火焰烘幹)。
②滴加1—2滴95%酒精固定(不可加熱固定)。
③加石炭酸複紅染液染色1—2min,水洗,自然幹燥 。
④在載玻片一端加一滴墨水,用一塊邊緣光滑的載玻片與墨水接觸,再以勻速推向另端,塗成均勻的一薄層,自然幹燥 。
⑤幹燥後用油鏡觀察。
結果:菌體紅色,莢膜無色,背景黑色。
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