（1）實驗材料
①染色液。石炭酸複紅液、堿性美藍溶液、3%鹽酸酒精。
②菌種。含結核分枝杆菌的痰標本。
③其他。普通玻片、酒精燈、接種環及顯微鏡等。
（2）實驗方法
①塗片
a、直接塗片和厚膜塗片。用接種環挑取約0.01ml膿性或呈幹酪樣部分痰液，製成10mm*10mm大小的均勻薄塗片，或取上述標本約0.1ml，製成20mm*15mm大小的厚膜塗片。自然幹燥，火焰固定後，行抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。
b、集菌塗片。І、沉澱集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混勻。經103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min），3000r/min離心30min，棄上清液，取沉澱物塗片做抗酸染色或金胺“0”熒光染色鏡檢；П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶內，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，經103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min）。冷卻後滴加汽油0.3ml，瓶口蓋玻璃紙加塞，塞緊瓶口，置振蕩器或手搖振蕩10min，再加蒸餾水至滿瓶口而又不外溢，靜置10—15min，將已編號的潔淨載玻片蓋在瓶口上，靜置15—20min，取下載玻片並迅速將載玻片翻轉至浸膜向上，或用接種環取瓶口液麵物塗於載玻片上，自然幹燥，火焰固定後做抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。
②染色
a、初染，在已固定的結核分枝杆菌痰標本塗片上放一小塊濾紙片，之後滴加數滴石炭酸複紅液後，將標本片放在火焰高處徐徐加溫，當塗片上液體出現蒸汽時離開火焰（切不可煮沸），待玻片稍冷卻後補充染液（以防幹燥或玻片斷裂 ），如此維持染色3—5min，待玻片冷卻後用水衝洗，甩幹。
b、脫色，在塗片上滴加數滴3%鹽酸酒精，輕輕晃動玻片，直至無紅色液體流下為止，一般作用1—3min，水洗，甩幹。
c、複染，滴加數滴堿性美藍液於塗片上，作用1min後，水洗，甩幹。用吸水紙印幹標本片或 自然幹燥後油鏡檢查。
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