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第一章 藥品衛生檢驗通則
一、供試品取樣及注意事項
1．供試品取樣應有一定數量，以使檢驗結果具有代表性。因此，正常的供試品，一般每批應隨機抽取兩瓶或兩盒以上的包裝單位。檢驗時，每次最少應分取兩瓶（盒）以上的樣品共10克或10毫升，中藥蜜丸至少應分取4丸以上共10克；貴重或微量包裝的供試品，取樣量可酌減
。
2．凡異常的供試品，則選取有疑問的樣品進行檢驗。
肉眼能看出發黴生蟲變質、活蟎的樣品，應判為不合格，無需再作抽樣檢驗。
3．檢查活蟎的樣品抽樣量，見活蟎的檢驗法。
4．供試品在檢驗前，應嚴格保持包裝的原有狀態，不得啟開，防止再汙染。並放在陰涼幹燥處，防止微生物再繁殖，以免影響檢驗結果。凡已將原包裝啟開，則無代表性，應另行取樣。
5．供試品在檢驗過程中，從開封至全部檢驗操作結束，須防止微生物再汙染和擴散。凡直接與樣品接觸的用具，均應事先滅菌並保持無菌；全部操作須在無菌室內進行，或在相應的條件下，按無菌操作規定進行。
6．供試品稀釋後，須在1—2小時內操作完畢，防止微生物繁殖或死亡。
7．供試品稀釋成供試液後，應在均勻狀態下取樣。凡因抑菌或不溶於水的劑型，其供試品應作特殊處理後進行檢驗。
8．從供試品檢出大腸杆菌或其它致病菌的報告發出起，該菌種保存一個月備查。如有疑問，可送藥檢部門或上一級藥檢單位複核。
二、供試品製備
1．凡固體樣品，應稱取10克，加在100毫升稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩衝液）中，經充分研磨或振搖製成供試液。液體樣品，則可量取10毫升加在90毫升稀釋劑中，混勻後成供試液。
2．凡含有防腐劑或抑菌成份且影響檢驗的供試品，可經離心沉澱集菌法及其他適宜的方法處理後，檢驗大腸杆菌和其他致病菌。集菌處理法如下：
取供試液10毫升，以無菌手續放在滅菌的尖底刻度離心管中，經每分鍾3500轉以上離心沉澱30分鍾，用滅菌毛細吸管吸取上清液棄掉，並留下管底的2毫升殘餘液，將其全部洗淨加在培養基中，進行增菌檢驗。含有不溶性藥渣的樣品稀釋液，可均勻吸取10毫升放在離心管中
，先經每分鍾500轉左右離心沉澱5分鍾，取其上清液放在另一滅菌尖底刻度離心管中，再經每分鍾約3500轉以上離心沉澱30分鍾，輕輕吸取上清液棄掉，取其管底的2毫升殘餘液全部洗淨加在培養基中，增菌檢驗即得。
3．非水溶性的軟膏、乳膏、油膏劑等，可稱取樣品5克，放在乳缽或燒杯中，加8毫升滅菌的吐溫—80充分研磨勻後，加入經140°幹熱滅菌半小時的西黃蓍膠2．5克研磨勻。再加少量45°的稀釋劑充分研磨，使呈均勻乳劑。隨後邊加入稀釋劑邊研磨，使成100毫升乳劑
，移至三角瓶中，即為1∶20供試液。
或稱取供試品2．5克，分別量取液體石蠟10毫升，吐溫—80．10毫升，稀釋劑30毫升。先將供試品置乳缽中，邊研磨邊滴加液體石蠟；然後再邊研磨邊滴加吐溫—80，研磨均勻後；再邊加入稀釋劑邊研磨，開始每次約1毫升，待起團塊時，加入稀釋劑3毫升，稍停一分鍾
，再輕輕研磨至乳化，將稀釋劑加完為止，即得1∶20供試液。
4．濾膜法：取規定量的供試品，按1毫升加入滅菌生理鹽水50毫升左右，搖勻，用滅菌吸管或注射器注入薄膜過濾器內，減壓抽幹後，用滅菌生理鹽水或其他適宜的溶劑衝洗薄膜3次，每次50毫升。取出薄膜，剪成幾條，加至10毫升滅菌稀釋劑中，充分搖動，使成供試液。可
供細菌、酵母菌和黴菌計數用。或將剪成幾條的上述薄膜加至有關的增菌培養基中培養，可供檢查綠膿杆菌或金黃色葡萄球菌用。
三、陽性菌株對照試驗
1．為便於研究觀察成藥製劑中，某些含有防腐劑和抑菌成份的幹擾作用，以及測試常規檢驗方法和培養基、試劑等的靈敏度時，可將定量的已知陽性對照菌加在供試品稀釋液中，按檢驗供試品的操作方法進行陽性菌的對照試驗。陽性對照菌應生長。
2．常用的陽性對照菌株，衛生部檢定所編號：大腸杆菌44102、沙門氏菌50094、綠膿杆菌10104、金黃色葡萄球菌26003和破傷風杆菌64067等。
3．對照試驗加入的已知活菌量，每批供試品應控製在50—100個範圍之內，需氧菌常用的計數方法，如金黃色葡萄球菌可用37℃培養18—20小時
－6
新鮮肉湯培養物，十倍遞增稀釋至10 ，取其0．1
－7
毫升按瓊脂平板表麵塗抹法或取10 稀釋液1毫升按澆碟法進行活菌數測定。按每毫升菌液內所含的活菌量，取適量加在供試品裏，對照檢驗即得。破傷風杆菌的陽性對照以作毒力試驗為主（具體操作見破傷風杆菌檢驗項下。）
4．作陽性菌株對照試驗時，應注意安全，嚴格防止對照菌汙染供試品和環境。為此，加入陽性菌的操作可在另外無菌室或其他適宜的地方進行。
第二章 藥品衛生檢驗法
一、細菌總數測定法
細菌總數的測定，是考察供試品每克或每毫升內所汙染的活菌數量。測定結果便於判明供試品被細菌汙染的程度，以及生產單位所用的藥品原料、工具設備和工藝流程、操作者的衛生狀況，是對供試品進行衛生學總評價的綜合依據。
1．供試品的測定：
固體供試品，以無菌操作稱取若幹克，按下列方法之一進行稀釋：
（1）將已稱取供試品置入滅菌乳缽中加入適量稀釋劑，充分研磨，然後移至於滅菌三角瓶中，共加入稀釋劑100毫升，使成1∶10均勻供試液。
（2）將已稱取的供試品連同100毫升的稀釋劑加入滅菌三角瓶或其他相應容器內，進行振蕩，使成1∶10的均勻供試液。
液體供試品，可量取10毫升加入90毫升稀釋劑，混勻即得。
用1毫升滅菌吸管，吸取1∶10供試液1毫升，沿管壁注入裝有9毫升滅菌的稀釋劑試管內，混勻即為1∶100稀釋液。
另取1毫升滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋。如此每遞增稀釋一次，應換用1支1
－3
毫升滅菌吸管並充分混勻，稀釋至10 或適當倍數備檢。
另用1毫升滅菌吸管1支，按高倍稀釋至低倍稀釋的順序分別吸取各稀釋度的液體1毫升，注入直徑9厘米的平皿內，或在作上述10倍遞增稀釋時，應稀釋妥一稀釋度，即可取1毫升稀釋液注入平皿內。一般可根據對供試品汙染情況的估計，從供試液起選擇2—3個適宜稀釋度進行
測定，每個稀釋度各用2—3個平皿。
稀釋液注入平皿後，應及時將熔化並冷至45—50℃的肉湯瓊脂培養基傾注平皿內，各約15毫升，隨即轉動平皿使充分混合均勻。待瓊脂凝固後，翻轉平板，置37℃培養箱內培養至24小時和48小時，並分別計算平板內生長的的菌落。一般以48小時的菌落數為準。
為減少片狀菌落的幹擾，也可采用0．001％ＴＴＣ瓊脂，在無菌室開蓋倒置或換滅菌的幹燥陶瓦蓋等方法使平板表麵幹燥後，再進行培養。
2．菌落計數方法：
先用肉眼觀察，點數菌落數（黴菌不包括在內），然後持5—10倍放大鏡檢查有無遺漏。各平板菌落計數後，求出同一稀釋度各平板生長的平均菌落數。如平板中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平板不宜計數。
3、細菌菌數報告：
一般的報告方法是選取同一稀釋度平均菌落數在30—300之間的平板，作為菌落總數測定的範圍。如每個稀釋度使用兩個平板，應采用兩個平板的菌落平均數。其中一個平板有較大片狀菌落生長時，或兩平板菌落數相差一倍以上，此稀釋度不宜采用。如每個稀釋度使用三個平板，
應采用三個平板菌落數的平均數，其中有兩個平板菌落數較接近，另一個平板相差在一倍以上，或有片狀菌落生長時，則應采用前者平均數為該稀釋度的菌落數，按下列規則乘其稀釋倍數報告之。
稀釋度的選擇：
（1）若隻有一個稀釋度，平均菌落數在30—300個之間時，乘以稀釋倍數報告之（見表1例1）。
（2）若兩個稀釋度，其平均菌落數均在30—300個之間，則應求出兩者總菌數之比，凡比值小於或等於2應報告其平均數，若大於2則報告其中較小的數字。（見表1例2、3）。
（3）若所有稀釋度的平均菌落數均多於300個，則應按稀釋度最高的平均菌落數，乘以稀釋倍數報告之（見表1例4）。
（4）若所有稀釋度的平均菌落數均少於30個，則應按稀釋倍數最低的平均菌落數，乘以稀釋倍數報告之（見表1例5）。
（5）若所有稀釋度的平均菌落數均不在30—300之間，其中一個稀釋度大於300，而相鄰的另一稀釋度小於30時，則以接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1例6）。
（6）若所有稀釋度均無菌生長，報告數為＜10個／克或毫升。
菌數的報告，菌數在100以內時，按實有數報告之，大於100時，采用左端前二位數字，在前兩位數字之後的數值，應以四舍五入法計算。為了縮短數字後麵零的個數，可用10的指數來表示（見表1）。
如供試品經檢驗，細菌數不合格，需複驗時，應重新取樣，依法複試兩次，細菌數仍有一次不合格時，則該供試品細菌數應判為不合格。
表1 細菌計數結果及報告方法
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
＼ 平均菌｜ 供試品稀釋倍數 ｜兩 數｜ 菌落 ｜
＼ 落數 ｜－－－－－－－－－－－－－－｜稀 ｜ 總數 ｜ 細菌總數報告方式
＼ ｜ －1｜ －2｜ －3｜釋 之｜ （個／ ｜ （個／克或毫升）
例 ＼ ｜10 ｜10 ｜10 ｜度 ｜ 克或 ｜
次 ＼｜ ｜ ｜ ｜菌 比｜ 亳升） ｜
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
1 ｜1365｜ 164｜ 20 ｜ — ｜ 16400｜ 16000｜或1．6×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
2 ｜2760｜ 295｜ 46 ｜1．6｜ 37750｜ 38000｜或3．8×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
3 ｜2890｜ 271｜ 60 ｜2．2｜ 27100｜ 27000｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 5
4 ｜不可計 ｜4650｜ 513｜ — ｜513000｜510000｜或5．1×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 2
5 ｜ 27 ｜ 11 ｜ 5 ｜ — ｜ 270 ｜ 270 ｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
6 ｜不可計 ｜ 305｜ 12 ｜ — ｜ 30500｜ 31000｜或3．1×10
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
二、黴菌總數測定法
黴菌總數（包括酵母菌）的測定，是考察供試品每克或每毫升內所汙染活的酵母菌、黴菌數量，借以判明供試品的酵母菌、黴菌汙染程度及其一般衛生狀況。
1．供試品的測定：
供試液與稀釋按細菌總數測定項下規定的方法進行。取供試液、1∶100和1∶1000的稀釋液各1毫升分別注入平皿內，每個稀釋度各用2—3個平皿，加入稀釋液後將熔化並冷至45—50°的虎紅瓊脂培養基約15毫升傾入平皿內，充分搖勻。凝固後，翻轉平板置25—2
8°培養72小時，計算平板內生長的黴菌菌落數。若有根黴或毛黴蔓延生長，為避免影響其它黴菌的計數時，應及時將此平板取出計數。
2．酵母菌黴菌菌數報告：
酵母菌、黴菌計數，應選取帶有菌絲體的菌落和酵母菌菌落進行點數。先點清每個平板上生長的菌落數，再求出每一稀釋度的平均菌落數。判定結果時，應選取平板上菌落數既清楚可數，平均又在5—50個範圍以內的菌落數，乘以稀釋倍數後，做為供試品的黴菌總數報告之。若有兩
個稀釋度的菌落數皆在5—50個以內或三個稀釋度皆不在此範圍之內時，應參照細菌總數測定的規則報告之。
一般眼科製劑的細菌、黴菌總數測定按上述方法進行並報告之。如抗生素或有抑菌作用的製劑，采用適宜的方法處理後，按常規方法進行。
如供試品經檢驗，黴菌總數不合格，需複檢時，應重新取樣，依法複試兩次。黴菌數仍有一次不合格時，供試品應判為酵母菌、黴菌數不合格。
三、大腸杆菌檢驗法
大腸杆菌來源於人和溫血動物的糞便。凡由供試品中檢出大腸杆菌時，表明該藥品已被糞便汙染，患者服用後，有被糞便中可能存在的其它腸道致病菌和寄生蟲卵等病源體感染的危險。因此，大腸杆菌被列為重要的衛生指標菌，是非規定滅菌口服藥品的常規必檢項目之一。
大腸杆菌檢驗程序。
表2 腸杆菌科各菌屬的生化特性鑒別表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜愛 ｜ ｜亞 ｜枸 ｜克 ｜ 腸 杆 菌 屬 ｜ 沙 雷 氏 菌 屬 ｜
菌屬 ｜艾 ｜誌 ｜德 ｜沙 ｜利 ｜櫞 ｜雷 ｜－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－｜
｜希 ｜賀 ｜華 ｜門 ｜桑 ｜酸 ｜伯 ｜ ｜ ｜ 哈夫尼亞 ｜ ｜ ｜ 液化 ｜
－－－－－－｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜那 ｜杆 ｜氏 ｜陰溝｜產氣｜－－－－－－｜粘 質｜紅色｜－－－－－｜
生化特性 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜
｜屬 ｜屬 ｜屬 ｜屬 ｜屬 ｜屬 ｜屬 ｜ ｜ ｜ ｜25℃ ｜ ｜ ｜ ｜25℃｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基質 ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基紅 ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-/+ ｜-/+ ｜+/- ｜-/+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反應 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+/- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸櫞 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜(+) ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
酸鹽 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
硫化氫（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
鐵） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜-, ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+)w ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氰化鉀 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
動力 ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明膠(22℃)｜- ｜- ｜- ｜- ｜(+) ｜- ｜- ｜(+) ｜-/ ｜ ｜- ｜+/ ｜+ ｜ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜(+) ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
賴氨酸脫羧 ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/ ｜+/- ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸雙水 ｜d ｜-/ ｜- ｜(+) ｜+/ ｜d ｜- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
解酶 ｜ ｜(+) ｜ ｜/+ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鳥氨酸脫羧 ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脫 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸鈉 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜+/- ｜+/- ｜+/- ｜d ｜- ｜+/- ｜- ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖產氣 ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+°/- ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜d ｜(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/ ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜(+) ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜-/(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+ ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
衛矛醇 ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜d ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水楊甙 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
側金盞花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
山梨醇 ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜+ ｜d ｜- ｜+/ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ 果膠杆菌屬｜ 形 杆 菌 屬 ｜普羅菲登斯菌屬
菌屬 ｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－
－－－－－－｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
生化特性 ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜25℃ ｜普 通｜奇異｜摩根氏｜雷極氏｜產堿｜司徒氏
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基質 ｜-/+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基紅 ｜-/+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反應 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸櫞 ｜d ｜+/(+) ｜d ｜+/ ｜- ｜+ ｜+ ｜+
酸鹽 ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
硫化氫（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
鐵） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜d ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜+ ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氯化鉀 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
動力 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明膠(22℃)｜ ｜+/(+) ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
賴氨酸脫羧 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸雙水 ｜- ｜-/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
解酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鳥氨酸脫羧 ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脫 ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸鈉 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖產氣 ｜-/+ ｜d ｜+°/- ｜+ ｜d ｜-/+ ｜d ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜+/- ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜d ｜d ｜(+)
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+/- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜d
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
衛矛醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水楊甙 ｜d ｜+ ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
側金盞花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
山梨醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜d
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
注：＋90％以上陽性；－90％以上陰性；（＋）遲緩陽性；ｄ有不同生化型；“微弱陽性；＋°微產氣；＋／（＋）多數陽性，少
數遲緩陽性；（＋）／＋多數遲緩陽性，少數陽性；＋／－多數陽性，少數陰性；－／＋多數陰性，少數陽性；－／（＋）多數陰
性，少數遲緩陽性；（＋）／－多數遲緩陽性，少數陰性；＋°／－多數陽性微產氣，少數陰性。
大腸杆菌檢驗程序圖解
－－－－－
｜供試品｜
－－－－－
↓稀釋
－－－－－
｜供試液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜膽鹽乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－－－－－－－－
｜ＭａｃＣ平板或ＥＭＢ｜
－－－－－－－－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－
｜純培養｜
－－－－－
37°↓18－24小時
－－－－－－－
｜染色、鏡檢｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ＩＭＶｉＣ試驗｜ ｜乳糖發酵｜
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜報 告｜
－－－－－
（一）增菌培養：
取供試液10毫升，接種於備妥的100毫升膽鹽乳糖增菌液內。置37°培養18—24小時，進行增菌。
（二）分離培養：
將上述增菌培養物，劃線接種於麥康凱瓊脂（ＭａｃＣ）或伊紅美蘭（ＥＭＢ）瓊脂平板上，置37°培養18—24小時，檢查有無疑似大腸杆菌菌落。大腸杆菌在麥康凱平板上的典型菌落呈鮮豔的桃紅、粉紅色；在伊紅美蘭平板上的典型菌落呈紫黑色，圓形，邊緣整齊，表麵光滑
濕潤，常有金屬光澤。由於藥物影響，亦呈現紫色、粉紫、中心灰紫、無黑心、濕潤等，常為大腸杆菌，均應注意挑選。
（三）純培養：
至少挑選2—3個疑似大腸杆菌菌落，分別接種於肉湯瓊脂斜麵或三糖（雙糖）鐵瓊脂斜麵，置37°培養18—24小時。
（四）染色鏡檢：
將疑似大腸杆菌的純培養物塗片、革蘭氏染色。經染色鏡檢證明，為革蘭氏陰性短杆菌者，應繼續做生化試驗。
（五）生化試驗：
1．乳糖發酵試驗
將上述純培養物接種於乳糖發酵管，置37°培養24—48小時，凡大腸杆菌，可發酵乳糖產酸產氣，或產酸不產氣時，加用酸性複紅指示劑的應顯紅色；加ＢＴＢ指示劑時顯藍色。產氣者，倒管內有氣泡。
2．ＩＭＶｉＣ試驗：
①靛基質試驗：將純培養物接種於蛋白腖水，置37°培養24—48小時，沿管壁加柯凡克氏試劑0．3—0．5毫升，輕微搖動，靜置片刻，觀察液麵。陽性反應，液麵呈玫瑰紅色；陰性反應液麵呈試劑本色。
②甲基紅試驗：將純培養的菌苔接種於磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基內，置37℃培養24—48小時，加入甲基紅試劑數滴，觀察結果。陽性反應呈鮮紅色或桔紅色；陰性反應呈黃色。
③Ｖ—Ｐ試驗：將純培養物接種於磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基內，置37°培養48小時，按培立脫法先加6％ａ－萘酚無水乙醇溶液1毫升，再加40％的氫氧化鉀溶液0．4毫升，輕搖後觀察結果。陽性反應，加入試劑後，應在15分鍾內顯紅色、深紅色。如不明顯，可延長至
4小時。
④枸櫞酸鹽利用試驗：將純培養的菌苔接種於西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂斜麵，37°培養24小時，觀察結果。陽性反應，斜麵有菌苔生長，培養基由綠色變為藍色。陰性反應斜麵無菌苔生長，培養基仍為綠色。當見有微量或痕跡生長的可疑現象時，應將待檢菌株分離，純化後再行試驗。
（六）供試品檢驗報告：
供試品增菌後，在麥康凱或伊紅美蘭瓊脂平板上分離的疑似大腸杆菌，經證實為革蘭氏陰性短杆菌，乳糖發酵試驗陽性，ＩＭＶｉＣ試驗呈＋＋－－或－＋－－反應者，應即報告供試品檢出大腸杆菌。〔注〕
大腸杆菌及其他致病菌檢查按一次檢出結果為準，不再抽樣複試。
〔注〕關於大腸杆菌的ＩＭＶｉＣ反應的說明
大腸杆菌ＩＭＶｉＣ試驗的模式反應，在一般情況下應為“＋＋－－”或將“－＋－－”也包括在內，共代表了絕大多數大腸杆菌（占99％）的實際反應結果，因而受到了國際上的廣泛承認，並將其列為大腸杆菌的常規鑒別ＩＭＶｉＣ反應公式。但個別大腸杆菌的ＩＭＶｉＣ反應，
也可能出現“＋－－－”和“＋＋－＋”等等異常現象。由於這種異常反應出現的頻率極少，沒有普遍性的代表意義，因而在分類鑒別和統計學上，可以忽略不計。
四、沙門氏菌檢驗法
沙門氏菌主要寄生在人體、哺乳動物和家禽的腸道內，可隨同糞便的排泄汙染水源，食品與藥品。沙門氏菌的種類繁多，有些對人有致病力，如傷寒沙門菌和副傷寒沙門氏菌；有些對動物有致病力，如鴨沙門氏菌和雛沙門氏菌；尚有一些對人和動物皆有致病力，如腸炎沙門氏菌、鼠傷
寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌等。它們能引起人類傷寒症、急性胃腸炎和敗血症等。
帶有這些細菌的人與動物常可直接或間接地汙染藥品的生產環境、工具設備和原料輔料，以及半成品和成品等。特別是用動物髒器製成的藥品，汙染機率較高，影響患者用藥安全，並有可能通過藥品的流通而傳播。故將沙門氏菌，應列為某些藥品的必檢項目。
沙門氏菌檢驗程序。
沙門氏菌檢驗程序圖解
－－－－－
｜供試品｜
－－－－－
↓稀釋
－－－－－
｜供試液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－
｜膽鹽乳糖增菌培養｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－－－－－－
｜ＳＳ與ＥＭＢ平板｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－－－
｜三糖鐵瓊脂｜
－－－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜動｜ ｜鏡｜ ｜凝｜ ｜ 一般生化反應 ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜集｜ ｜－－－－－－－－－－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜試｜ ｜葡乳麥甘蔗靛硫尿賴脫氰｜
｜力｜ ｜檢｜ ｜驗｜ ｜萄 芽露 基化素氨羧化｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜糖糖糖醇糖質氫酶酸酶鉀｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜報 告｜
－－－－－
（一）增菌培養：
取1∶10供試品稀釋液10毫升，接種於備妥的100毫升膽鹽乳糖增菌液內。置37°培養18—24小時，進行增菌。
（二）分離培養：
取上述增菌培養物，劃線接種於ＳＳ瓊脂和ＥＭＢ瓊脂平板各一個（劃線時，適當增加ＳＳ瓊脂平板的塗抹量2—3環，可提高陽檢率），置37°培養18—24小時。凡沙門氏菌，在ＳＳ和ＥＭＢ瓊脂平板上，菌落一般無色透明或半透明，圓形，周邊整齊，表麵光滑濕潤，在ＳＳ
瓊脂平板上中心有時呈黑褐色。如有上述疑似菌落，應選取2—3個分別進行純培養，按下列方法鑒別。
（三）初步鑒別：
將上述純培養物分別穿刺並劃線接種三糖鐵（ＴＳＩ）瓊脂，置37°培養18—24小時。凡在ＴＳＩ瓊脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜麵呈堿性，不變色），下層底部分解葡萄糖呈酸性變黃色（有氣泡或無氣泡），有動力或無動力，以及產生或不產生黑褐色的硫化氫反應，並經
塗片染色鏡檢為革蘭氏陰性杆菌，都應繼續做生化試驗和血清學檢查。
（四）生化試驗：
取上述疑似菌落的純培養物、分別接種至葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖等發酵管培養基，並接種蛋白腖水和尿素培養基，經37°培養2—5天，觀察結果。沙門氏菌一般生化反應和動力檢查，絕大數應為、葡萄糖＋，乳糖－，麥芽糖＋，甘露醇＋，蔗糖－，靛基質－，硫化
氫＋，尿素酶－，動力＋。當一般生化試驗符合時，應做賴氨酸脫羧酶及氰化鉀試驗。沙門氏菌賴氨酸脫羧酶試驗＋，氰化鉀－。係統生化試驗，詳見表2：腸杆菌科各菌屬的生化特性鑒別表。
（五）動力試驗：
取上述純培養物穿刺接種半固體培養基，於37°培養24小時後，觀察動力表現。無動力表現的培養物，應在室溫（25°左右）保留2—3天後，再觀察。
（六）血清學檢查：
取上述疑似菌落的ＴＳＩ瓊脂培養物少許，與沙門氏菌Ａ—Ｆ多價Ｏ血清作玻片凝集試驗，並以生理鹽水作對照試驗。若凝集試驗為陰性反應時，應將菌苔製成濃菌液在100℃水浴中保溫30分鍾後再進行Ａ—Ｆ多價Ｏ血清凝集試驗。將反應結果，結合生化試驗，判定之。
（七）供試品檢驗報告：
凡菌落形態與初步鑒定符合下列情況分別報告如下：
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
血 清 ｜ Ａ—Ｆ多 ｜生理｜ 一般｜
｜ 價Ｏ血清 ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－｜鹽水｜ 生化｜ 報告
待 檢 菌 ｜ ｜ 100°｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜ 菌苔 ｜ 03′ ｜對照｜ 反應｜
順 序 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－｜－－－－－｜－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－
1 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜ 符合｜檢出沙門氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
2 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜不符合｜轉有關部門進一步檢定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
3 ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ 符合｜檢出沙門氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
4 ｜ － ｜ ＋ ｜－ ｜不符合｜轉有關部門進一步檢定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
5 ｜ － ｜ － ｜－ ｜不符合｜未檢出沙門氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
6 ｜ － ｜ － ｜－ ｜ 符合｜轉有關部門進一步檢定
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
五、綠膿杆菌檢驗法
假單胞菌屬的綠膿杆菌對人類有致病力，同藥品衛生有關。特別在大麵積的燒傷、燙傷患者，眼科疾病和其他外傷方麵，常因感染綠膿菌後病情加重，造成患者傷處化膿，並可引起菌血症等，眼角膜潰瘍甚至失明，損害病人健康。因此一般眼科製劑和外傷用藥，規定不得檢出綠膿杆菌
。
綠膿杆菌檢驗程序（見次頁）。
綠膿杆菌和其他革蘭氏陰性杆菌的主要特性鑒別見表3。
（一）增菌培養：
取供試液10毫升，接種於備妥的100毫升膽鹽乳糖培養液內，置37°培養18—24小時。
增菌後，如有綠膿杆菌生長，液體表麵多有一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。
一般滴眼劑如為抗生素或有抑菌作用的供試品，取樣4毫升，用濾膜法處理後，將薄膜分成4片，分別接入100毫升的膽鹽乳糖增菌液兩瓶中，其中一瓶接陽性菌作對照。置37°培養18—24小時。
（二）分離培養：
取上述增菌培養物（應盡量從培養液的薄菌膜部位挑取），劃線在十六烷三甲基溴化銨或明膠十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上，置37°培養18—24小時。
凡綠膿杆菌在十六烷三甲基溴化銨平板上或在明膠十六烷三甲基溴化銨平板上其菌落扁平無定形周邊擴散或略有蔓延，表麵濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養基常擴散有水溶性藍綠色色素，在含有明膠平板上除上述形態外，菌落周圍呈現明膠液化環。
挑取疑似綠膿杆菌菌落2—3個進行純培養。
（三）染色鏡檢：
挑取疑似菌落純培養物、塗片、革蘭氏染色，經鏡檢為陰性杆菌者，應進行氧化酶試驗。
（四）生化試驗
1．氧化酶試驗
取一小塊白色潔淨的濾紙片放在平皿內，用無菌玻璃棒挑取綠膿杆菌疑似菌落的純培養物，塗在濾紙片上，然後滴加一滴新鮮配製的1％二甲基對苯二胺鹽酸鹽試液於培養物上，在30秒鍾之內，紙片上的待檢培養物出現粉紅色，並逐漸變為紫紅色時，即為氧化酶試驗陽性。若培養物
不變色，氧化酶試驗陰性，供試品可按未檢出綠膿杆菌報告。
2．綠膿菌素試驗：
挑取純培養物分別接種在專供測定綠膿菌素用的ＰＤＰ瓊脂斜麵培養基上，置37°培養24小時後，在試管內加氯仿3—5毫升，充分振搖，將瓊脂斜麵培養物中的待檢色素提取在氯仿液裏。待氯仿提取液呈藍綠色時，用吸管將其移到另一試管中，並在該液中加1Ｎ的鹽酸1毫升左
右，振搖後，靜置片刻，如果在上層的鹽酸液內出現粉紅色時，即為陽性，表明被檢菌的培養物中有綠膿菌素存在。如陰性，應繼續將純培養物接種在ＰＤＰ瓊脂斜麵上，37°培養2—3天後，檢查有無綠膿杆菌素產生。
3．硝酸鹽還原產氣試驗：
綠膿杆菌檢驗程序圖解
－－－－－
｜供試品｜
－－－－－
↓
－－－－－
｜供試液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜膽鹽乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37° ↓18—24小時
－－－－－－－－－－－－－－－
｜十六烷三甲基溴化銨平板或明｜
｜膠十六烷三甲基溴化銨平板 ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
37° ↓18—24小時
－－－－－
｜純培養｜
－－－－－
↓
－－－－－－－
｜染色、鏡檢｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－
｜氧化酶試驗｜
－－－－－－－
｜
（－） －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ （＋）
↓ ↓
陰 性 －－－－－－－－
↓ ｜綠膿菌素試驗｜
－－－－－ －－－－－－－－
｜報 告｜ （一） ↓ （＋）
－－－－－ －－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－ －－－－－
↓ ↓ ↓ ｜報 告｜
－－－－－
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜明膠液化｜ ｜硝酸鹽還原｜ ｜42°生長試驗｜
｜ 試驗 ｜ ｜產氣試驗 ｜ ｜ ｜
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜報 告｜
－－－－－
表3 綠膿杆菌和其他革蘭氏陰性杆菌的主要特性鑒別表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜分離 ｜ 色素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鑒 別 培 養 ｜－－－｜－－－－－－－－－－－｜ ｜氧｜氧｜ ｜精解｜硝 產｜ ｜42
｜ ｜ ｜ ｜ ｜鞭 ｜化｜ ｜ 乙 ｜氨 ｜酸 ｜液｜生
－－－－－－－－－－－｜十六烷｜ 綠 ｜ 螢 ｜ 其 ｜毛 ｜葡｜化｜ 酰 ｜酸 ｜鹽 ｜化｜長
｜三甲基｜ 膿 ｜ 光 ｜ 他 ｜染 ｜萄｜ ｜ 氨 ｜雙 ｜還 ｜明｜試
菌 種 ｜溴化銨｜ 菌 ｜ 色 ｜ 色 ｜色 ｜糖｜酶｜ 酶 ｜水酶｜原 氣｜膠｜驗
｜瓊脂 ｜ 素 ｜ 素 ｜ 素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
綠膿杆菌 ｜ ＋ ｜＋／－｜＋／ ｜＋／－｜端極｜＋｜＋｜ ＋ ｜＋ ｜ ＋ ｜＋｜＋
(P. aeruginosa) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜單毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
螢光假單胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜端極｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜－／＋｜＋｜－
(P. fluorescens) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜多毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
惡臭假單胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜” ｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜ － ｜－｜－
(P. putida) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
洋蔥假單胞菌 ｜＋／－｜ － ｜ － ｜－／＋｜” ｜＋｜＋｜ ＋ ｜－ ｜ － ｜＋｜＋／－
(P. cepacia) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
偽鼻疽假單胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜＋｜＋｜ － ｜＋ ｜ － ｜＋｜＋
(P. pseudomallei) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
嗜麥芽假單胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜＋｜－｜ － ｜－ ｜ － ｜＋｜＋／－
(P. malfophilia) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
腐敗假單胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜端極｜＋｜＋｜ － ｜－ ｜ － ｜＋｜－／＋
(P. putrefaciens) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜單毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
司塔澤單假胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜端極｜＋｜＋｜ － ｜－ ｜ ＋ ｜＋｜＋
(P. stutzeri) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜單毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
產堿假單胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜－｜＋｜ － ｜－ ｜ － ｜－｜＋
(P. alcaligenes) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
類產堿假單胞菌 ｜ － ｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜－｜＋｜ － ｜－ ｜ － ｜－｜＋
(P. pseudoaloaligenes)｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
氧化木糖無色杆菌 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ － ｜周毛｜＋｜＋｜ ＋ ｜－ ｜ ＋ ｜－｜＋
(A. xylosoxidans) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
產堿杆菌屬 ｜－／＋｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜－｜＋｜－／＋｜－ ｜－／＋｜－｜＋
(Alcaligenes. SP.) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
糞產堿杆菌 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜ － ｜” ｜－｜＋｜ ＋ ｜－ ｜－／＋｜－｜＋
(A. faecalis) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
注：＋／－表示多陽性，多陰性，－／＋表示多陰性，少陽性。
挑取純培養物，接種在硝酸鹽腖水培養基中，置37°培養24小時觀察結果。凡在硝酸鹽腖水培養基內的小倒管中有氣體產生者，即為陽性反應，表明該菌能還原硝酸鹽，並將亞硝酸鹽分解產生氮氣。
4．明膠液化試驗：
取上述綠膿杆菌疑似菌落的純培養物，分別穿刺接種在明膠培養基內，置37°培養24小時，取出放冰箱內10—30分鍾，如仍呈溶解狀，即為明膠液化試驗陽性。如凝固不溶者，為陰性反應。
（四）42°生長試驗：
挑取純培養物，分別接種在肉湯瓊脂斜麵上，放在41°±1°培養箱中培養24—48小時，凡綠膿杆菌應能發育生長。
（五）供試品檢驗報告：
凡在上述平板上分離出的疑似綠膿杆菌菌落，經證實為革蘭氏陰性杆菌，氧化酶和綠膿菌素試驗同為陽性者，即可報告供試品檢出綠膿杆菌。如果綠膿菌素試驗陰性，則須液化明膠，硝酸鹽還原產氣和42°生長試驗三者皆為陽性時，可報告供試品檢出綠膿杆菌。
六、金黃色葡萄球菌檢驗法
金黃色葡萄狀球菌在自然界分布較廣，常可汙染藥品及食品，是葡萄狀球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血症。某些溶血性菌株尚可產生耐熱性的腸毒素，加熱到100°30分鍾毒素不致破壞，有時細菌已被殺死，毒素仍然存在，以致引
起急性胃腸炎，是人類食物中毒症的常見病因之一。因此，目前規定，凡外用藥和眼科製劑不得檢出金黃色葡萄球菌。
金黃色葡萄球菌檢驗程序。
（一）增菌培養：
取供試液10毫升，接種於備妥的100毫升肉湯培養基或北沙參腖水培養基中。上述兩種培養基亦可加亞碲酸鈉。置37°培養24小時。
一般滴眼劑如為抗生素或有抑菌作用的供試品，取樣4毫升，用濾膜法處理後，將薄膜分成4片，分別接入100毫升亞碲酸鈉肉湯或北參沙腖水培養基兩瓶中，其中一瓶接陽性菌作為對照。置37°培養18—24小時。
（二）分離培養：
將上述增菌培養液搖勻後，取1—2環在卵黃高鹽瓊脂、或在血瓊脂、ＴＭＰ瓊脂及ＴＭＰ北沙參瓊脂平板上，劃線後置37°培養24—72小時。金黃色葡萄球菌在上述各瓊脂平板上的菌落形態見表4。
表4 金黃色葡萄球菌在選擇培養基上的菌落特征
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
培 養 基 ｜ 菌 落 形 態 特 征
－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
1．卵黃高鹽瓊脂 ｜金黃色、圓形突起，邊緣整齊，外周有卵磷脂被分解
｜ 的乳濁圈。直徑約1—2毫米。
－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
2．血瓊脂 ｜金黃色，圓形突起，邊緣整齊，外周有透明的溶血環
｜ （乙型溶血）。直徑約1—2毫米。
－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
3．ＴＭＰ北沙參瓊脂＊｜墨黑色，圓形突起，邊緣整齊，外周有黃色環。直徑
｜ 約1—1．5毫米。
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4．ＴＭＰ瓊脂 ｜墨黑色，圓形突起，邊緣整齊，外周有黃色環。直徑
｜ 約0．7—1毫米。
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
注：＊應取增菌培養物3—5環劃線分離，以提高檢出率。
（三）純培養：
於上述任一分離平板上挑取疑似金黃色葡萄球菌2—3個菌落分別劃線接種於肉湯瓊脂斜麵培養基上，置37°培養18—24小時。其培養物用作染色鏡檢、甘露醇發酵試驗及血漿凝固酶試驗。
金黃色葡萄球菌檢驗程序圖解
－－－－－
｜供試品｜
－－－－－
↓
－－－－－
｜供試液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓37° 24—48小時 ↓
－－－－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ 亞碲酸鈉肉湯｜ ｜肉湯或北沙參腖｜
｜或亞碲酸鈉北沙｜ ｜ ｜
｜參腖水培養基 ｜ ｜水培養基 ｜
－－－－－－－－－ －－－－－－－－－－
↓37° 24—72小時 ↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ 卵黃高鹽平板 ｜
｜ 血瓊脂平板 ＴＭＰ瓊脂平板 ｜
｜ ＴＭＰ北沙參高鹽瓊脂平板 ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜純培養｜
－－－－－
37°↓18—24小時
－－－－－
｜鏡 檢｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－ －－－－－－－－－
｜甘露醇發酵｜ ｜血漿凝固酶試驗｜
－－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜報 告｜
－－－－－
（四）染色鏡檢：
挑取純培養物，經塗片革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌應為革蘭氏陽性球菌，菌體成堆，象葡萄狀或少量的散在排列。
（五）甘露醇發酵
取上述純培養物，接種至甘露醇發酵培養基中，置37°培養18—24小時，應能發酵產酸，培養基呈紅色。
（六）血漿凝固酶試驗
1．玻片法：取一片清潔幹燥的載玻片，在兩邊分別滴加滅菌生理鹽水和血漿各一大滴。用接種環沾取待檢菌的純培養物，先在鹽水滴中、後在血漿滴中充分研磨混合，對照觀察反應。凡血漿滴在五分鍾內出現團塊或顆粒狀的凝塊時，而鹽水滴仍呈均勻混濁狀者，可判定血漿凝固酶試
驗陽性。若混菌後的血漿滴和鹽水滴，都呈均勻混濁狀時，則為陰性。凡玻片試驗呈陰性反應時，應繼續用試管法進行凝固酶試驗。
2．試管法：取滅菌小試管兩支，用滅菌吸管吸取血漿原液或1∶1鹽水血漿稀試液加在試管中，每管各0．5毫升。然後取待檢菌肉湯培養物0．5毫升或瓊脂斜麵上的純菌苔，充分混懸在一支血漿管內使呈濃菌液狀，另一支血漿管不加菌作為對照。將兩支小管同時放在37°培養
箱或水浴箱內保溫，3小時開始檢查，以後每隔適當時間檢查一次，直至24小時。每次取出觀察反應，可輕輕將血漿管傾斜，仔細觀察。凡不加菌的血漿能流動自如，加菌的血漿凝固者，應判為凝固酶試驗陽性。經保溫24小時，若加菌的血漿無凝固現象，則為陰性。陽性對照菌凝固酶
試驗應為陽性。
（七）供試品檢驗報告：
凡從上述平板上分離的疑似菌落，經染色鏡檢證明為革蘭氏陽性葡萄狀球菌，並證實可發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，應報告供試品檢出金黃色葡萄球菌。
七、破傷風杆菌檢驗法
破傷風杆菌屬於專性厭氧梭狀芽孢杆菌屬，廣泛分布於泥土上層及人和牲畜的糞便中。以根、莖類植物為原料的藥品，常可受到汙染。本菌為專性厭氧菌，菌體細長，周身有鞭毛，能運動。成熟的芽孢多為正圓形；未成熟的孢芽為卵圓形，位於菌體的頂端，直徑大於菌體的寬度。帶有
芽孢的菌體形似鼓槌狀，是破傷風杆菌的形態特征。本菌為革蘭氏染色陽性，但培養較久後常為革蘭氏染色陰性。其繁殖體的抵抗力同其它無芽孢菌相似，而芽孢則有高度抵抗力，經濕熱100°；幹熱150°一小時尚能存活，在塵埃或土壤中可數年不死。
破傷風病主要由破傷風杆菌的外毒素——神經毒素引起的，這種毒素有選擇性地作用於神經係統，特別是能引起脊髓前角細胞中毒，從而發生伸肌痙攣性收縮，呈角弓反張強直狀態的破傷風特有的抽搐症狀。因此，用於深部組織、創傷和潰瘍麵的外用製劑不得檢出破傷風杆菌。
（一）增菌產毒培養：
以無菌手續取供試品約0．1ｇ共3份，分別加至0．1％葡萄糖庖肉培養基中（用前煮沸5分鍾，迅速冷卻），其中一管加0．05ｍｌ（或少許）經37°培養2－3天的陽性菌。置75－80°水浴保溫20分鍾，然後置適宜的厭氧條件下（厭氧培養箱、厭氧袋、厭氧罐或分別
加入凡士林石蠟等量混合液，將液麵蓋住），於35－37°培養3－4天。如有厭氧菌生長，可產氣、消化碎肉並有特殊臭氣。具有上述現象之一者，應塗片作革蘭氏染色鏡檢，分離培養並作毒力試驗。若染色鏡檢發現具有破傷風杆菌芽孢形態，但毒力試驗為陰性時，需將增菌液轉種至
0．1％葡萄糖庖肉培養基內，並同時在新黴素葡萄糖血平板上進行分離培養1－2次，以提高毒力。
（二）分離培養：
取上述可疑增菌液（鏡檢陽性而毒力試驗陰性者），接種新黴素葡萄糖血平板2－3個，置厭氧條件下（同前），於37°培養3－4天，破傷風杆菌在此血平板上，菌落一般為蔓延生長似霧狀、細絲狀或呈細小，中心略突，邊緣有細微樣延展等多種類型，常見有β－溶血。
（三）毒力試驗：
選用16－18ｇ或18－22ｇ同性無孕的健康小白鼠3－5隻，於後腿內側皮下（肌肉）或背側頸部皮下注射增菌液0．3－0．5ｍｌ，注射後6小時即可開始觀察發病情況至48小時。
為證實小白鼠是否由破傷風外毒素引起的破傷風症狀，應同時做破傷風抗毒素保護試驗。
破傷風杆菌檢驗程序
－－－－－
｜供試品｜
－－－－－
75－80°↓20′
－－－－－－－－－
｜厭 氧 培 養｜
－－－－－－－－－
35－37°↓72－96ｈ．
－－－－－－－－－－－－－－－
｜產氣 消化碎肉 鏡檢陽性 ｜
｜ 並有臭氣 ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－
＋↓ ↓－
－－－－－－－－－ －－－－－－
↓ ↓ ｜報告陰性｜
－－－－－－ －－－－－－ －－－－－－
｜毒力試驗｜ ｜分離培養｜
－－－－－－ －－－－－－
↓ 35－37°↓ 厭氧培養72－96ｈ．
－－－－－－－ －－－－－－
＋↓ ↓－ －－－－－－－－→｜疑似菌落｜
－－－－－－ －－－－－ －－－－－－
｜報告陽性｜ ｜轉 種｜ ↓
－－－－－－ －－－－－ －－－－－
35－37°↓厭氧培養72ｈ．｜純 培 養｜
－－－－－－ －－－－－－
｜毒力試驗｜ ↓
－－－－－－ －－－－－－
↓ ｜毒力試驗｜
－－－－－－－－－ －－－－－－
＋ ↓ ↓－ ↓
－－－－－－ －－－－－－ －－－－－－－－－
｜報告陽性｜ ｜轉 種｜ ＋↓ ↓－
－－－－－－ －－－－－－ －－－－－－ －－－－－－
35－↓厭氧培養 ｜報告陽性｜ ｜報告陰性｜
37° 72ｈ． －－－－－－ －－－－－－
－－－－－－
｜毒力試驗｜
－－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－
＋↓ ↓－
－－－－－－ －－－－－－
｜報告陽性｜ ｜報告陰性｜
－－－－－－ －－－－－－
以注射用水稀釋破傷風抗毒素使每毫升含120單位，取0．3－0．5ｍｌ和供試品增菌液0．3－0．5ｍｌ，同時給小白鼠注射，或先注射抗毒素，再於半小時內注射增菌液。
（四）供試品檢驗報告：
凡供試品經增菌產毒培養後，塗片染色鏡檢為典型破傷風杆菌，並經毒力試驗為陽性，應報告供試品檢出破傷風杆菌。若鏡檢未發現典型破傷風杆菌，而毒力試驗為陽性，也應按陽性結果報告。如毒力試驗和鏡檢均為陰性時則報告為陰性結果。若經增毒培養後，毒力試驗陰性而鏡檢雖
為陽性時，則報告為陰性結果。（注意事項：凡從事破傷風杆菌檢驗的人員，應注射破傷風類毒素。作毒力試驗時要戴手套。所用的物品必須經高壓滅菌後洗滌）
八、活蟎檢驗法
蟎，屬於節肢動物門，蜘蛛綱，蜱蟎目，種類繁多，分布甚廣。其生活習性各異，營自由生活或寄生生活。在土壤、池沼和江河湖海裏，動、植物體上，儲藏食品和藥品中，都有它們的存在。體形微小，多在一毫米以下。一般呈圓形或卵圓形，頭胸腹分界不明顯。幼蟎足三對，成蟎足
多數為四對，足由六節組成。口器向前端突出，螯肢常呈螯鉗狀，有齒。須肢節數因種類而異，由一～二節到五節組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端背麵或兩側有一～二對眼。呼吸通過氣管或體壁進行。軀體兩側對稱，表麵被有堅硬的幾丁質的板，保護其內部器官
和支持肌肉固定。體表有剛毛，它的形狀、數目及彼此間長短比例和排列位置因種類而異，在分類上有重要意義。
蟎可蛀蝕損壞藥品，使藥品變質失效，並可直接危害人體健康或傳播疾病。例如，中成藥中發現的腐食酪蟎，對人具有致病力。一種是引起皮炎，另一種是引起消化係統、泌尿係統及呼吸係統的疾病。因此，用於口服、創傷、粘膜和腔道的藥品，不得檢出活蟎。
供試品取樣量：每批取兩瓶或兩盒以上的包裝單位；貴重或微量包裝的供試品，取樣量可酌減。
（一）活蟎的一般檢驗法
1．直檢法：取供試品先用肉眼觀察，有無疑似活蟎的白點，再用5－10倍放大鏡或雙筒實體顯微鏡檢視，有蟎者，用解剖針或粘在銅（或鐵）絲上的頭發絲或小毛筆挑取，活蟎放在滴有一滴甘油水（甘油與水1∶4混合而成，下同）的載玻片上，置顯微鏡下觀察。
2．漂浮法：將供試品放在盛有飽和食鹽水的扁形稱量瓶或適宜的容器內，加飽和食鹽水至容器的三分之二處，攪拌均勻，置雙筒實體顯微鏡下檢查，或繼續加飽和食鹽水至瓶口處（為防止鹽水同樣品溢出汙染桌麵，宜將上述容器放在裝有適量甘油水的培養皿中），用載玻片沾取水麵
上的漂浮物，置顯微鏡下檢查有無活蟎。
3．分離法：也稱烤蟎法。將供試品放在特製的分離器或者附有孔徑大小適宜的篩網的普通玻璃漏鬥裏，利用活蟎避光，怕熱的習性，在漏鬥的廣口上麵放一個60－100瓦的燈泡，距離藥品約6厘米處，照射1－2小時。活蟎可沿著漏鬥內的底部細頸內壁向下爬，可用小燒杯裝半
杯甘油水，放在漏鬥的下口處，收集爬出來的活蟎。
（二）各劑型藥品的活蟎檢驗法
1．大蜜丸：將藥丸外殼（蠟殼或紙蠟殼等）置酒精燈小火焰上轉動，適當燒灼（殺滅殼外可能汙染的活蟎）後，小心打開。
（1）表麵完好的藥丸，可用消毒的解剖針刺入藥丸，手持解剖針，在放大鏡或雙筒實體顯微鏡下檢查。同時注意檢查丸殼的內壁或包丸的油紙有無活蟎。
（2）有蟲粉現象的藥丸，也可用放大鏡、雙筒實體顯微鏡直接觀察，或有漂浮法檢查。
2．小蜜丸、水丸和片劑：
（1）表麵完好的丸、片，可將藥品放在預先襯有潔淨黑紙的培養皿或小搪瓷盤中，用直檢法檢查。如未檢出蟎時，可再用漂浮法或烤蟎法檢查。
（2）有蟲粉現象的丸、片，也可用直檢法或漂浮法檢查。
同時注意檢查藥瓶內壁與內蓋有無活蟎。
3．散劑、衝服劑和膠囊等：先直接檢查藥瓶內蓋及塑料薄膜袋的內側有無活蟎。後將藥品放在襯有潔淨黑紙的搪瓷盤裏，使成薄層，直接檢查。檢不出蟎時，再用漂浮法。並注意檢查藥瓶內壁是否有蟎。
4．塊狀衝劑：直接檢查供試品的包裝蠟紙、玻璃紙或塑料薄膜及藥塊表麵有無活蟎。有蟲粉現象者，也可用漂浮法檢查。
5．液體製劑及半流體浸膏：先用75％乙醇將藥瓶的外蓋螺口周圍消毒後，小心旋開外蓋，用直檢法，檢查藥瓶外蓋的內側及瓶口內外的周圍與內蓋有無活蟎。
附1．蟎標本的製作：
（1）臨時標本：將檢出的活蟎挑放在滴有一滴75％乳酸的載玻片上，加上蓋玻片，手持載玻片，在酒精燈小火焰上來回移動，緩緩加熱片刻後，即可鏡檢。鑒定後的蟎體，可取下放入70％乙醇中保存，或適當處理。
（2）長期標本：用解剖針或粘在銅（或鐵）絲上的頭發絲或小毛筆輕緩仔細地挑取蟎體1－2隻，放在滴有一滴清水的載玻片上，洗去雜質，取出放在滴有封固液的載玻片上，在放大鏡或雙筒實體顯微鏡下進行整姿後，加上蓋玻片，在酒精燈小火焰上適當加熱，促使蟎體附肢伸展。
置50－60°烘箱中數日，幹燥即得。也可在蓋玻片周圍用加拿大樹膠封固，然後在載玻片一端貼上標簽即可。
附2．蟎類封固液常用配方及其製法：
（1）水合氯醛 70克 阿拉伯膠粉8克
冰醋酸 3毫升 甘油 5毫升
麝香草酚 1克 蒸餾水 10毫升
先將阿拉伯膠、水合氯醛及蒸餾水置乳缽中，充分研磨，使完全溶解。然後加入冰醋酸、甘油和麝香草酚，再充分混合，用雙層紗布濾過，靜置一周後，取其上層澄清液裝在棕色滴瓶內備用。
（2）水合氯醛 200克 阿拉伯膠粉30克
甘油 20克 蒸餾水 50毫升
將阿拉伯膠粉倒入燒杯內，加入蒸餾水，隨加隨攪拌，直至阿拉伯膠溶解，置水浴加熱至40－50°，加入水合氯醛溶解後，加入甘油混勻，抽氣濾過，裝入棕色滴瓶內備用。
第三章 附 錄
一、稀釋劑
1．生理鹽水
（1）成份：
氯化鈉（ＮａＣｌ） 8．5克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
取氯化鈉，加水溶解，分裝瓶內後15磅20分
鍾滅菌即得。
（3）用途：供稀釋供試品用。
2．0．1Ｍ磷酸鹽緩衝液
（1）成份：
磷酸氫二鈉（Ｎａ2ＨＰＯ4·12Ｈ2Ｏ）
25．8克
磷酸二氫鈉（ＮａＨ2ＰＯ4·2Ｈ2Ｏ）
4．4克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
混合以上成份，攪拌使溶，ＰＨ應為7．1－7．3，
分裝，15磅20分鍾滅菌。
（3）用途：供稀釋供試品用。
二、常用試劑和指示劑
（二）常備試劑和用法
1．甲基紅試劑（Ｍ·Ｒ反應測定用）
0．02％甲基紅乙醇溶液：
甲基紅 0．1克
95％乙醇 300毫升
蒸餾水 200毫升
用法：接種細菌於磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基內，經37°培養48小時。加入甲基紅試劑數滴於上述培養物中，觀察結果。如陽性為紅色，桔紅色，陰性為黃色。
2．培立脫氏試劑（Ｖ·Ｐ反應測定用）
甲液：6％α￣萘酚無水乙醇溶液：
取α￣萘酚6克，溶於無水乙醇100毫升。
乙液：40％氫氧化鉀溶液：
取氫氧化鉀40克，加蒸餾水至100毫升。
用法：接種細菌於磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基內，經37°培養48小時，先加甲液約1毫升，再加乙液0．4毫升，15分鍾至4小時內如顯紅色為陽性反應。
3．靛基質試劑
柯凡克氏試劑：
純戊醇 150毫升
對二甲氨基苯甲醛 10克
純濃鹽酸 50毫升
將對二甲氨基苯甲醛加入純戊醇中，攪動使其完全溶化，將純濃鹽酸一滴一滴地徐徐加入，邊加邊搖，不能加得太快，以免發生驟熱使溶液顏色變深。此試劑應小量配製，保存於冰箱內備用。
用法：接種細菌於蛋白腖水培養基內，於37°培養24－48小時。沿管壁加柯凡克氏試劑約0．3－0．5毫升，並輕輕搖動，若液麵顯玫瑰紅色為陽性。
4．4／30000虎紅溶液：
取虎紅（又稱四氯四碘螢光素或孟加拉紅）0．1克，加蒸餾水至750毫升即得。
5．1％2、3、5一氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）溶液：
稱取ＴＴＣ0．1克，加蒸餾水10毫升溶解，10磅30分鍾滅菌。
6．0．1％煌綠溶液：
稱取煌綠0．1克加水100毫升，溶解即得。本液配製後宜10天內使用，日久失效。
7．1％亞碲酸鈉（鉀）溶液：
①精密稱取亞碲酸鈉1克，加至100毫升新鮮煮沸並冷至50°的蒸餾水中，溶解即得。
②精密稱取亞碲酸鈉1克，加至100毫升ＰＨ7．4滅菌的50°的蒸餾水中，溶解即得。
8． 20％尿素無菌溶液：
稱取尿素20克，加水至100毫升，充分搖勻，使其溶解。用除菌器過濾，分裝滅菌容器中即得。如無除菌設備，可按無菌操作手續取尿素20克，加無菌水至100毫升，並加入麝香草酚1克，在室溫放置1－2天即可使用。
（二）常用的指示劑
1．0．5％酸性複紅：
稱酸性複（品）紅0．5克，用100毫升蒸餾水溶解後，加入1Ｎ氫氧化鈉約16毫升至淺棕色。並不斷振搖。於沸水浴內保持15分鍾。靜置2小時，用濾紙過濾。濾液保存暗處備用。（變色範圍ＰＨ6．0－7．4）。
2．0．2％和0．02％酚紅：
稱酚紅0．5克研細，加1Ｎ氫氧化鈉1．43毫升使呈桔紅色。加蒸餾水至250毫升使溶，即0．2％的酚紅液，可作為尿素培養基的指示劑用。
若將0．2％酚紅用新鮮蒸餾水稀釋10倍，即為0．02％酚紅液，可供測ＰＨ用。
3． 1％酚紅水溶液：
稱取酚紅1克研細，加1Ｎ氫氧化鈉液2．86毫升，使呈紅色，再加蒸餾水至100毫升，使完全溶解後，分裝在棕色試劑瓶內，可供培養基做指示劑用。
4． 10％堿性複（品）紅乙醇飽和溶液：
稱堿性複紅10克研細，加95％的乙醇100毫升，放置過夜，濾紙過濾即得（密閉保存）。
5． 0．4％和0．04％溴麝香草酚蘭（又稱Ｂ．Ｔ．Ｂ）：
稱溴麝香草酚蘭0．4克加1Ｎ氫氧化鈉0．64毫升研磨，加蒸餾水至100毫升即得。
若將0．4％溴麝香草酚蘭加蒸餾水稀釋10倍，即為0．04％，可供測定ＰＨ用（變色範圍ＰＨ6．0－7．6）。
6．0．2％和0．5％亞甲（美）蘭：
稱亞甲蘭0．2克，加蒸餾水至100毫升，溶解，即為0．2％；如稱亞甲蘭0．5克，加蒸餾水至100毫升，溶解，即為0．5％。
7． 1％中性紅：
稱中性紅1克研細，加95％的乙醇60毫升，溶解，加蒸餾水至100毫升即得。
8． 2％伊紅（曙紅 Ｙ）：
稱伊紅2克，加蒸餾水至100毫升，溶解，即得。
三、常用染色液及染色法
（一）革蘭氏染色法：
1．染液製備：
①結晶紫液
甲液：
結晶紫 2克
95％乙醇 20毫升
乙液：
草酸銨〔（ＮＨ4）2Ｃ2Ｏ4〕 0．8克
蒸餾水 80毫升
甲乙液相混、靜置48小時後使用。此染液較穩
定，在密閉的棕色瓶中可儲存數月。
②碘液
碘（Ｉ2）片 1克
碘化鉀（ＫＩ） 2克
蒸餾水 300毫升
先用3－5毫升蒸餾水溶解碘化鉀，再投入碘片，待碘全溶後，加水稀釋至300毫升。此染液穩定，在密閉的棕色瓶中可存數月。
③脫色液：95％乙醇
④複染液：
（ａ）沙黃（番紅）複染液：取沙黃0．25克，先使溶於95％乙醇10毫升，完全溶解後再加蒸餾水至100毫升即得。
（ｂ）稀石炭酸複紅液：稱取堿性複紅10克，研細，加95％乙醇100毫升，放置過夜，濾紙過濾。取該液10毫升，加5％石炭酸水溶液90毫升混合，即為石炭酸複紅液。再取此液10毫升加水90毫升，即成稀石炭酸複紅液。
2．染色方法：
（1）塗片幹燥：
①在潔淨的載玻片上，用蠟筆劃好格，作好有關的注明。
②在載玻片上，每個格內滴無菌水或蒸餾水。用接種環挑取少許菌苔，於水滴邊緣輕輕塗幾下。
③自然風幹或微熱促其快幹，幹後在火焰上通過2－3次以固定塗片。
（2）染色步驟：
①滴加結晶紫染液，覆蓋約1分鍾。水洗。
②滴加碘液，覆蓋約1分鍾。水洗。吸幹。
③滴加95％乙醇液約20－30秒鍾。水洗。吸幹。
④滴加沙黃染液或稀石炭酸複紅液複染1分鍾。水洗。濾紙吸幹。
（3）染色結果：
革蘭氏陽性菌染成藍紫色。
革蘭氏陰性菌染成紅色。
3．注意事項：
①玻片必須潔淨無油，以免影響塗片質量。
②塗片的菌量，切不可濃厚，否則，看不清單個菌體形態，且易出現假陽性。
③用火焰固定時，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。過熱會影響形態的觀察。
④一般以檢查培養18－24小時的菌為宜。革蘭氏陰性細菌的染色反應穩定，不易受菌齡的影響。革蘭氏陽性菌的染色反應有的受菌齡的影響；即較幼的細胞，如培養18－24小時或更短的時間呈陽性反應；而較老的細胞，如培養24－48小時以上的細胞則部分或全部細胞轉變
為陰性反應。在區分革蘭氏染色反應時應注意。
（二）鞭毛染色法（1）
1．染液製備：
20％鞣酸溶液（加溫溶解） 2毫升
鉀明礬飽和溶液 2毫升
石炭酸飽和溶液 5毫升
10％堿性複（品）紅液 1．5毫升
按比例將上述溶液混合後，在室溫放置2－3日，用濾紙濾清，裝在棕色滴瓶內備用。此液配成後五周內使用，不可久存。
2．染色方法：
（1）按無菌操作手續，取微量待檢菌接種在蛋白腖水培養基中，置37°培養箱內培養6－8小時備用。
（2）將上述待檢菌腖水培養物，輕輕旋轉搖勻。用滅菌毛細吸管吸取一滴，加在清潔幹燥的載玻片上，將玻片左右搖動，使菌液自然散開，放在室溫或37°晾幹，使呈一塊薄層菌膜。然後在幹燥菌膜上滴滿染色液，保持1－2分鍾，輕輕水洗，幹後鏡檢。如鞭毛著色較淺時，可適
當延長染色時間。
（3）染色結果，菌體和鞭毛皆呈紅色，菌體顏色較深，鞭毛稍淡。染色時間短者鞭毛較細，時間稍長鞭毛較粗，可根據不同情況增減染色時間，以使鞭毛清晰可見。
鞭毛染色法（2）
1．染液製備：
甲液：丹寧酸 5克
氯化鐵（ＦｅＣｌ3） 1．5克
福爾馬林（15％） 2．0毫升
氫氧化鈉（ＮａＯＨ）1％ 1．0毫升
乙液：硝酸銀（ＡｇＮＯ3） 2克
蒸餾水 100毫升
製備乙液時，待硝酸銀溶解後，取出10毫升備用，向餘下的90毫升硝酸銀液中滴加濃氫氧化銨，先呈很濃厚的沉澱，再繼續滴加至剛剛溶解沉澱成澄清液為止。再將備用的硝酸銀溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈現薄霧，但輕搖則消失，繼續邊滴加邊搖動，待澄清液呈現略有輕微
不消散的薄霧狀為止。如霧重，則銀鹽沉澱，不宜使用。
2．染色方法：
（1）將待檢菌接種在新製備的肉湯瓊脂斜麵上，置37°培養16－20小時，備用。
（2）在載玻片的中部相隔一厘米處，用接種環各沾一滴蒸餾水，然後用接種環挑取濕潤處的菌苔少許於一端的水滴中，傾斜玻片使培養物流至另一水滴中，兩水滴自然相通，菌體從上位自然擴散到下位水滴中，待幹燥後染色。
（3）在幹燥塗片上加甲液3－5分鍾，用蒸餾水衝洗。將殘水瀝幹或用乙液衝去殘水後，加適量乙液保持30－60秒鍾。染色時在酒精燈上稍加熱，使染液出現蒸汽即可，用蒸餾水衝洗。
（4）鏡檢：菌體及鞭毛皆染成茶色。
3．注意事項：
（1）染液最好隨用隨配，存放至次日效果則差。
（2）一定要充分洗淨甲液後再加乙液，否則背景較髒。
（3）防止水及培養物沾有氯化物。
（4）切忌用接種環塗抹培養物。
（5）載玻片一定要洗淨。先用洗衣粉煮沸，再水洗，幹後放在洗液中，浸泡24小時，取出水洗除去殘酸，瀝幹，存放於95％乙醇中備用。
（6）加熱時最好置金屬板上，使載玻片受熱均勻。
（三）芽孢染色法：
1．染液製備：
（1）石炭酸複紅液：堿性複紅4克，溶於95％乙醇100毫升中，再取此液10毫升與5％石炭酸溶液90毫升混勻即成。
（2）堿性美蘭液：美蘭2克，溶於95％乙醇100毫升中，再取此液30毫升與0．01％ＫＯＨ溶液100毫升混勻即成。
2．染色方法：
（1）取待檢菌芽孢體較多的培養物，塗片、幹燥及加熱固定後，滴滿石炭酸複紅液於塗片上，並以弱火加熱，使染液冒蒸汽約5分鍾。冷後水洗，並用95％乙醇脫色2分鍾。水洗，加堿性美蘭液複染半分鍾。水洗，幹後鏡檢。
（2）染色結果，芽孢呈紅色，菌體為藍色。
四、培養基的製法及用途
1．肉湯培養基：
（1）成份：牛肉浸液（1∶3）
1000毫升
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
（2）製法：
將上述成份微溫使溶，用ＮａＯＨ液調ＰＨ為7．4－7．6，煮沸，過濾，分裝，15磅20分鍾滅菌。
（3）用途：增菌
注：牛肉膏3克加蒸餾水1000毫升使溶可代替牛肉浸液（1∶3）1000毫升。
2．肉湯瓊脂培養基：
（1）成份：牛肉浸液（1∶3）
1000毫升
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
瓊脂 15－20克
（2）製法：取腖、氯化鈉、瓊脂加入肉浸液內，加熱，煮沸，待瓊脂完全溶化後，混勻，用1ＮＮａＯＨ液調ＰＨ為7．4－7．6，過濾，分裝，15磅20分鍾滅菌。
（3）用途：細菌總數測定和純培養用。
3．0．001％ＴＴＣ肉湯瓊脂培養基（即0．001％2、3、5氯化三苯基四氮唑瓊脂培養基）：
（1）成份：牛肉膏 3克
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
瓊脂 18－20克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
取牛肉膏、蛋白腖、氯化鈉加入蒸餾水，微溫使溶，用氫氧化鈉溶液調ＰＨ為7．4－7．6，加瓊脂，煮沸熔化，過濾分裝。15磅20分鍾滅菌。用前將其熔化冷至60°左右加入滅菌的1％2、3、5一氯化三苯基四氮唑（簡稱ＴＴＣ或稱紅四氮唑）水溶液1毫升，搖勻，傾注
平皿。
（2）用途：細菌總數測定用。
4．虎紅瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 5克
葡萄糖 10克
磷酸二氫鉀（ＫＨ2ＰＯ4） 1克
硫酸鎂（ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ） 0．5克
瓊 脂 15－20克
4
－－－－－虎紅（四氯四碘螢光素） 水溶液
30000
100毫升
蒸餾水 900毫升
（2）製法：將蛋白腖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂混合，加熱使瓊脂熔化後加入葡萄糖溶解，過濾，加入虎紅（四氯四碘螢光素）水溶液，分裝，10磅30分鍾滅菌。
（3）用途：黴菌總數測定用。
5．膽鹽乳糖（Ｂ．Ｌ）增菌液：
（1）成份：
蛋白腖 20克
氯化鈉 5克
磷酸氫二鉀（Ｋ2ＨＰＯ4） 4克
（或Ｋ2ＨＰＯ4·3Ｈ2Ｏ 5．2克）
磷酸二氫鉀（ＫＨ2ＰＯ4） 1．3克
牛膽鹽 1．3克
（或去氧膽酸鈉 0．25克）
乳糖 5克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：除乳糖、膽鹽（或去氧膽酸鈉）外，將上述其它成份混合，微溫使溶，用ＮａＯＨ調ＰＨ為7．3－7．4，過濾。加入乳糖、膽鹽（或去氧膽酸鈉）待溶後，搖勻，分裝10磅30分鍾滅菌。
（3）用途：用於大腸杆菌，沙門氏菌和綠膿杆菌的增菌培養。
注：膽鹽是抑菌劑，它對革蘭氏陽性菌有良好的抑菌作用，但用量過大，對大腸杆菌亦有輕度抑製作用。每1000毫升培養基中膽鹽用量如下：
牛膽鹽，去氧膽酸鈉如上述處方量。豬膽鹽5克，羊膽鹽5克，三號膽鹽（Ｂｉｌｅ Ｓａｌｔ Ｎｏ．3），五號膽鹽1．5克。
6．伊紅美蘭（ＥＭＢ）瓊脂：
（1）成份：
肉湯瓊脂（ＰＨ7．4） 100毫升
20％乳糖溶液 5毫升
2％伊紅水溶液 2毫升
0．5％美蘭水溶液 1．3－1．6毫升
（2）製法：將普通肉湯瓊脂加熱熔化。冷至60°左右，將滅菌的上述三種溶液按量以無菌手續加入，搖勻，製成平板備用。
（3）用途：供大腸杆菌及沙門氏菌檢驗用。
注：
①大腸杆菌在伊紅美蘭瓊脂平板上的菌落有時不典型，使用的平板表麵應幹燥，接菌培養24小時內觀察為宜。
②市售幹燥伊紅美蘭瓊脂培養基，可按說明書使用。
7．麥康凱（ＭａｃＣ）瓊脂：
（1）成份：
蛋白腖 20克
乳糖 10克
氯化鈉 5克
牛膽鹽 5克
瓊脂 15－20克
1％或0．5％中性紅水溶液
2．5或5毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
除乳糖、膽鹽、中性紅水溶液外、將其它成份混合，微溫溶解。用ＮａＯＨ調ＰＨ為7．4－7．6。煮沸至瓊脂熔化後過濾。加入膽鹽、乳糖、中性紅水溶液，搖勻分裝。10磅30分鍾滅菌。製成平板備用。注意避光保存。
（3）用途：供分離大腸杆菌用。
8．磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基：
成份：
蛋白腖 5克
磷酸氫二鉀（Ｋ2ＨＰＯ4） 5克
葡萄糖 5克
蒸餾水 1000毫升
製法：將上述成份加入蒸餾水中，微溫使溶。調ＰＨ為7．2－7．4，煮沸過濾，分裝試管，10磅30分鍾滅菌。
用途。供Ｍ－Ｒ和Ｖ－Ｐ試驗用。
9．蛋白腖水培養基：
（1）成份：
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：加熱溶化上述成份。調ＰＨ為7．0－7．2煮沸過濾，分裝，10磅30分鍾滅菌。
（3）用途：供靛基質試驗用。
10．枸櫞酸銨（西蒙氏枸櫞酸鹽）瓊脂：
（1）成份：
枸櫞酸鈉（無水） 2克
氯化鈉 5克
硫酸鎂（ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ） 0．2克
磷酸二氫銨（ＮＨ4Ｈ2ＰＯ4） 1克
磷酸氫二鉀（Ｋ2ＨＰＯ4） 1克
瓊脂 18－20克
0．4％溴麝香草酚蘭（Ｂ．Ｔ．Ｂ）液
20毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：除Ｂ．Ｔ．Ｂ和瓊脂外，混合上述成份，微溫使溶，調ＰＨ為7．0－7．2。加瓊脂，煮沸使熔化，過濾，加入Ｂ．Ｔ．Ｂ液混勻。分裝試管，10磅30分鍾滅菌。置成斜麵，備用。
（3）用途：供枸櫞酸鹽利用試驗用。
注：
①所用瓊脂應為不含遊離糖，用前可用水浸泡或衝洗除糖。
②枸櫞酸鈉含2Ｈ2Ｏ，需加2．28克。
11．糖類發酵培養基：
（1）成份：
蛋白腖 1克
氯化鈉 0．5克
糖類 1克
0．5％酸性複紅指示劑 1毫升
（或0．4％ＢＴＢ 0．6毫升）
蒸餾水 100毫升
最終ｐＨ7．2－7．4
（2）製法：
稱取蛋白腖和氯化鈉加在蒸餾水中，微溫使溶，調節ｐＨ至7．4，煮沸濾清後，按量加入不同糖類和酸性複紅或ＢＴＢ指示劑溶解混勻，分裝至加倒管的滅菌小試管中，每管約3－4毫升，經8磅15分鍾滅菌備用。用未經滅菌的小試管分裝，則需10磅30分鍾滅菌。
（3）用途：
供金黃色葡萄球菌和腸道杆菌屬的生化鑒別試驗用。凡能分解糖類發酵產酸者，培養基加酸性複紅指示劑，可由粉紅色變為紅色；如加ＢＴＢ指示劑，則由藍綠色變為黃綠色。產酸並產氣者，管內小玻璃倒管中有氣泡。
12． 5％乳糖發酵培養基：
（1）成份：
蛋白腖 0．2克
氯化鈉 0．3克
磷酸氫二鈉（Ｎａ2ＨＰＯ4·12Ｈ2Ｏ）
0．2克
0．4％ＢＴＢ指示劑 0．6毫升
乳糖 5克
蒸餾水 100毫升
（2）製法：除乳糖和ＢＴＢ指示劑外，其他成份加在蒸餾水中，微溫使溶，調節ｐＨ至7．4，煮沸濾清，補足液量。加入乳糖及ＢＴＢ溶液混勻後，分裝在滅菌的並有倒管的小試管內，每管約2毫升，8磅15分鍾滅菌，備用。
（3）用途：凡遲發酵乳糖的細菌，接種後置37°培養24小時內，絕大部分可發酵產酸。
13．ＳＳ瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 5克
牛肉膏 5克
瓊脂 20克
乳糖 10克
膽鹽 8．5克
枸櫞酸鈉（Ｎａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7·2Ｈ2Ｏ）
8．5克
硫代硫酸鈉（Ｎａ2Ｓ2Ｏ3·5Ｈ2Ｏ）
8．5克
枸櫞酸鐵銨 1克
1％中性紅水溶液 2．5毫升
0．1％煌綠溶液（新配） 0．33毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
先將蛋白腖、牛肉膏、瓊脂、蒸餾水製成ｐＨ7．4的普通肉湯瓊脂，10磅30分鍾滅菌。趁熱加入乳糖，搖勻。再依次加入其他成份，充分搖勻，使溶解，倒成平板備用。
（3）用途：供分離鑒別腸道細菌用。
注：
①製好的平板宜當日使用，一般不超過三天，否則效力可能減低。並應貯於冷暗處。
②膽鹽用膽牛鹽、三號膽鹽（Ｂｉｌｅ Ｓａｌｔ Ｎｏ．3）皆可。
③可用市售沙門氏誌賀氏菌屬瓊脂幹燥培養基，用法參見瓶簽說明。
14．三糖鐵（ＴＳＩ）瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 15克｝或蛋白
蛋白腖 5克｝腖20克
氯化鈉 5克
乳糖 10克
蔗糖 10克
葡萄糖 1克
硫酸亞鐵 0．2克
瓊脂 12－15克
0．2％酚紅溶液 12．5毫升
硫代硫酸鈉 0．2克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：除糖、指示劑、硫酸亞鐵和硫代硫酸鈉外（硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉先用少量水溶解），其它成份加在蒸餾水中，微溫使溶，調ｐＨ為7．4。過濾，加入其餘成份，分裝試管。10磅30分鍾滅菌，趁熱置成短斜麵高層，凝後備用。應避光置冷暗處保存。
（3）用途：供腸道細菌初步鑒別用。
注：亦可用雙糖鐵瓊脂培養基。
15．氨基酸脫羧酶測定培養基：
（1）成份：
蛋白腖 5克
牛肉膏 5克
Ｄ－葡萄糖 0．5克
維生素Ｂ6醛（吡哆醛Ｐｙｒｉｄｏｘａｌ）
5毫升
溴甲酚紫（1．6％） 0．625毫升
甲酚紅（0．2％） 2．5毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
將以上成份加熱溶解，調ｐＨ為6．0，再加指示劑。將上述基礎培養基分出100毫升作空白對照。再加Ｌ－賴氨酸，使濃度達到1％。如用ＤＬ型氨基酸，濃度達到2％。再調ｐＨ為6．0。搖勻，分裝小試管，每管3－4毫升，10磅30分鍾滅菌。
（3）用途：
供腸杆菌科的細菌鑒定用。指示劑呈紫色或紫紅色為陽性反應，呈黃色為陰性反應。對照管應呈黃色。
16．氰化鉀培養基：
（1）成份：
蛋白腖 3克
氯化鈉 5克
磷酸二氫鉀 0．225克
磷酸氫二鈉（Ｎａ2ＨＰＯ4·2Ｈ2Ｏ）
5．46克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
將以上成份溶解後調ｐＨ至7．6，10磅30分鍾滅菌。冷卻後，加15毫升0．5％的氰化鉀液，無菌分裝至滅菌的小試管中，每管1毫升。在4°可保存二周。同時做一份不加氰化鉀的空白對照培養基。
（3）用途：
供腸杆菌科各屬鑒別用。能在氰化鉀培養基中生長者，為陽性反應。不生長者為陰性反應，但空白對照培養基上應生長。
注：
①氰化鉀為劇毒藥，操作時應特別小心。
②培養基用後，每管加入幾粒硫酸亞鐵和0．5毫升20％氫氧化鉀以去毒，然後滅菌洗刷。
17．十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養基：
（1）成份：
牛肉膏 3克
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
十六烷三甲基溴化銨（Ｃｅｔｒｉｍｉｄｅ）
0．3克
瓊脂 15－20克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：除瓊脂外，將上述成分混合加熱溶解，調節ｐＨ至7．4－7．6加入瓊脂。10磅20分鍾滅菌後，冷至50°左右傾注平皿，製成平板備用。
（3）用途：供分離綠膿杆菌用。
18．明膠十六浣三甲基溴化銨瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 20克
氯化鎂（無水） 1．4克
硫酸鉀（無水） 10克
明膠 75克
瓊脂 18－20克
十六烷三甲基溴化銨 0．3克
甘油（化學純） 10毫升
蒸餾水 100毫升
（2）製法：
取蛋白腖、氯化鎂和硫酸鉀，加在蒸餾水中微溫使溶。調節ｐＨ至7．6，加熱煮沸過濾，補足液量。趁熱加入甘油和十六烷三甲基溴化銨，振搖溶解混勻。加入明膠後浸泡15分鍾，加熱熔解混勻。最後加瓊脂，在水浴中加熱煮沸熔化，振搖混勻，分裝。經10磅30分鍾滅菌後，
冷至50°左右傾注平皿，凝固備用。
（3）用途：
供檢驗綠膿杆菌分離培養用，可直接觀察能否產生綠膿菌素及液化明膠。劃線後，須正置放在培養箱內培養，以免明膠被菌液化後流溢皿內。
19．綠膿菌素測定用培養基（ＰＤＰ瓊脂）：
（1）成份：
蛋白腖 20克
氯化鎂（無水） 1．4克
硫酸鉀（無水） 10克
瓊脂 18－20克
甘油（化學純） 10毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
稱取蛋白腖、氯化鎂和硫酸鉀，加在蒸餾水中微溫使溶。調節ｐＨ至7．6，煮沸過濾補足液量。趁熱加入甘油振搖混勻，加入瓊脂煮沸熔化後，分裝至試管內，每管約6毫升。15磅20分鍾滅菌後，置成斜麵，凝固備用。
（3）用途：
供測定綠膿菌素用。
20．硝酸鹽腖水培養基：
（1）成份：
蛋白腖 10克
酵母膏 3克
硝酸鉀 2克
亞硝酸鈉 0．5克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
稱取蛋白腖和酵母膏，加在蒸餾水中微溫使溶。用ＮａＯＨ液調節ｐＨ7．2－4．7，煮沸濾清後補足液量，趁熱加入硝酸鉀和亞硝酸鈉溶解混勻。分裝在加有倒管的試管內，每管6－8毫升，10磅30分鍾滅菌後備用。
（3）用途：
供檢驗綠膿杆菌時測定硝酸鹽還原分解產氣試驗用。
21．明膠培養基：
（1）成份：
牛肉膏 3克
蛋白腖 5克
明 膠 120克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
稱取各成份加在蒸餾水中，浸泡約20分鍾，隨時攪拌，加熱使熔。調節ｐＨ至7．4，分裝在試管內約3－5毫升，10磅30分鍾滅菌後，直立放置，凝後備用。
（3）用途：供測定細菌能否使明膠液化試驗用。
22．亞碲酸鈉肉湯培養基：
（1）成份：
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
牛肉膏 3克
蒸餾水 1000毫升
1％亞碲酸鈉液 3毫升
（2）製法：
稱取蛋白腖、氯化鈉和牛肉膏加在蒸餾水中，微溫使溶，調節ｐＨ7．6－7．8，加熱煮沸濾清後補足液量，定量分裝在三角瓶內，每瓶100毫升，10磅30分鍾滅菌後備用。
另外精確稱取0．1克亞碲酸鈉，加在10毫升滅菌蒸餾水內，溶後即為1％的亞碲酸鈉液。臨用前將其加在上述肉湯培養基中，每100毫升加0．3毫升，混勻即得。
注：此液須臨時配製，不可久存。
（3）用途：
供金黃色葡萄球菌增菌培養用。
23．亞碲酸鈉北沙參腖水培養基：
（1）成份：
蛋白腖 15克
酵母浸膏 5克
氯化鈉 5克
磷酸氫二鉀 5克
10％北沙參浸液 150毫升
蒸餾水 850毫升
最終ｐＨ7．4－7．6
（2）製法：
北沙參浸液的製備：取北沙參100克，用水洗淨浸泡在1000毫升蒸餾水中，置冰箱過夜泡軟。次日取出將沙參切割成片，仍置原蒸餾水中繼續浸泡2小時。然後加熱煮沸30分鍾，用四層紡布濾浸液，並將藥渣用蒸餾水浸洗1－2次合並在浸液中，補足原液使成1000毫升即
為10％的北沙參浸液，分裝，10磅30分鍾滅菌備用。第一次開瓶用過之後，可在浸液內加入1％的氯仿作防腐劑，蓋好瓶塞充分振搖，第二天再振搖數次即可長期保存在冰箱內備用，不必再高壓滅菌。
稱取各成份加在蒸餾水中，微溫使溶，調節ｐＨ為7．6－7．8，加熱煮沸用濾紙過濾，補足液量，混勻分裝在三角瓶內，每瓶100毫升，10磅30分鍾滅菌備用。
亞碲酸鈉北沙參腖水培養基的製備：
在上述每100毫升北沙參腖水中，加新配製的1％亞碲酸鈉液0．3毫升，混勻即得。
（3）用途：供金黃色葡萄球菌增菌用。
24．卵黃高鹽瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 6克
氯化鈉 30克
牛肉膏 1．8克
瓊脂（用量3％） 23克
蒸餾水 650毫升
10％氯化鈉卵黃液 100毫升
（2）製法：
取新鮮雞蛋一個，將殼用碘酒及酒精棉球充分擦拭消毒後，用無菌鑷子在雞蛋兩端各打開一個小孔，將蛋清棄掉，以無菌手續取出卵黃，放在裝有玻璃珠的100毫升10％氯化鈉滅菌水溶液的三角瓶中，充分搖勻，製成卵黃高鹽水懸液備用。
稱取蛋白腖、牛肉膏和氯化鈉加在蒸餾水中，微溫使溶後，用ＮａＯＨ調節ｐＨ為7．6－7．8，煮沸過濾。再按量加入3％的瓊脂煮沸，使熔，過濾，分裝。15磅20分鍾滅菌，待冷至60°時，將上述卵黃高鹽水懸液加在其中，充分搖勻後傾注平皿，凝後備用。
（3）用途：
供分離培養金黃色葡萄球菌用。
25．血瓊脂培養基：
（1）成份：
肉湯瓊脂 100毫升
無菌脫纖維兔血（或羊血）
5－10毫升
（2）製法：將肉湯瓊脂培養基加熱熔化，待冷至50°左右，以無菌手續吸取無菌脫纖維兔血加入搖勻，製成平板。置冰箱內，備用。
（3）用途：供分離金黃色葡萄球菌及破傷風杆菌用。
無菌脫纖維血製備法：脫纖維血可從家兔心髒抽取，取血時應嚴格消毒皮毛防止汙染。取出的血液應立即注入裝有玻璃珠的滅菌燒瓶內，充分搖動脫除血纖維後，置冰箱內保存備用。
26．ＴＭＰ北沙參高鹽瓊脂培養基：
（1）成份：
蛋白腖 20克
酵母浸膏 5克
氯化鈉 40克
磷酸氫二鉀 5克
10％北沙參浸液 150毫升
蒸餾水 850毫升
瓊脂 18－20克
甘露醇 5克
1％酚紅水溶液 2．5毫升
1％亞碲酸鉀（鈉）液 15毫升
最終ｐＨ7．4－7．6
（2）製法：
10％的北沙參浸液，可按亞碲酸鈉北沙參腖水培養基項下的方法製備。除甘露醇、酚紅、瓊脂和亞碲酸鉀（鈉）之外，稱取其它成份加在蒸餾水中，微溫使溶並混勻後，調節ｐＨ7．6－7．8。加入瓊脂煮沸熔化。過濾除去沉澱，按量加入甘露醇和酚紅溶解混勻。定量分裝，10
磅30分鍾滅菌後備用。
臨用前精確稱取0．1克亞碲酸鉀，加在10毫升滅菌蒸餾水中，溶後即為1％亞碲酸鉀液，取上項滅菌熔化後的北沙參瓊脂，每100毫升加入亞碲酸鉀液各1．5毫升，混勻後傾注平皿。亞碲酸鉀須臨用配製，加量要準確。製成平板須在冰箱內保存，三日內用完，否則效果下降。
（3）用途：
供金黃色葡萄球菌分離培養用。
27．ＴＭＰ瓊脂培養基：
ＴＭＰ北沙參高鹽瓊脂培養基如不加10％北沙參浸液即為ＴＭＰ瓊脂培養基。
28．尿素培養基：
（1）成份：
蛋白腖 1克
氯化鈉 5克
磷酸二氫鉀 2克
葡萄糖 1克
尿素 2克
（或20％的無菌尿素溶液 10毫升）
瓊脂 15克
0．2％酚紅溶液 6毫升
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：
一法：除酚紅、尿素、葡萄糖和瓊脂外，用水微溫溶解以上成份，調節ｐＨ至7．2，加入瓊脂，煮沸熔化，再加入尿素、葡萄糖和酚紅，搖勻。
分裝於滅菌試管內，8磅10分鍾滅菌，置成斜麵備用。
二法：除尿素、葡萄糖、瓊脂和酚紅外，其他成份混於水中，微溫使溶，調ｐＨ至7．0－7．2，加入瓊脂，煮沸熔化過濾，加入葡萄糖和酚紅搖勻，分裝於三角瓶，10磅20分鍾滅菌。待冷至50－55°，以無菌手續按比例加入無菌的20％尿素溶液，搖勻，再分裝滅菌小試
管中，置成斜麵即可。
（3）用途：供鑒別沙門氏菌屬與變形杆菌屬用。
注：
①尿素不穩定，製定培養基時，應嚴格控製滅菌溫度和時間。
②接種細菌時，要挑取大量細菌，濃厚塗布於整個斜麵。
③20％無菌尿素液的配製，詳見試劑的配製。
29．半固體培養基：
（1）成份：
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
牛肉膏 3克
瓊脂 4－6克
蒸餾水 1000毫升
（2）製法：除瓊脂外，混合上述成份，微溫使溶，調ｐＨ至7．6，加入瓊脂，煮沸熔化，過濾，分裝小試管，15磅20分鍾滅菌後，直立放置，凝後備用。
（3）用途：供動力檢查和保存菌種用。
30．庖肉培養基：
（1）牛肉碎塊的製備：取新鮮牛肉，除去脂肪及筋腱，加水煮沸約10分鍾，切成約5見方毫米的小塊，稱重，按1∶3（肉∶水）加蒸餾水，置4－10°浸泡18－20小時後，煮沸1小時，用白布過濾（濾液即為1∶3牛肉浸液），肉渣以自來水漂洗2次，然後加入適量氫氧
化鈉，攪勻，使ｐＨ在8．4左右，浸泡過夜，次日傾去上層水，用蒸餾水衝洗2－3次，放在紗布上，自動瀝幹無滴水（不要擠壓）。將肉渣鋪在搪瓷盤上，15磅20分鍾滅菌，於80－100°烘幹，篩去碎屑，裝瓶保持幹燥，備用。
（3）用途：供破傷風杆菌增菌用。
31．0．1％葡萄糖庖肉培養基：
製備方法與庖肉培養基相同。另在肉湯培養基內加入0．1％葡萄糖即可。再加庖肉，用10磅30分鍾滅菌，ｐＨ應為7．2－7．6。
用途：供破傷風杆菌增毒用。
32．1％葡萄糖血瓊脂：
取肉湯瓊脂加入1％葡萄糖，10磅30分鍾滅菌後（ｐＨ應為7．2－7．6），冷至約50°時，以無菌手續加入5－10％的脫纖維兔血或羊血混勻，傾注平皿，凝後，烘幹凝固水備用。
用途：供分離破傷風杆菌用。
33．庖肉瓊脂培養基：
取庖肉培養基，加0．1－0．3％瓊脂，熔化滅菌後即得。
用途：供破傷風杆菌保存菌種用。
34．新黴素葡萄糖血瓊脂
（1）成份：
蛋白腖 10克
氯化鈉 5克
葡萄糖 10克
新黴素 0．1克
牛肉浸液（1∶3） 1000毫升
（2）製法：除葡萄糖、新黴素外、混合上述其它成份，加熱使溶解後，加入葡萄糖、新黴素，10磅30分鍾滅菌（ｐＨ應為7．2－7．4）。冷至45－50°時，以無菌手續加入6－8％的脫纖維兔血（或羊血），搖勻，傾注平皿，製成血平板，用前烘幹表麵冷凝水，便於分
離。
（3）用途：供分離破傷風杆菌用。
五、血漿的製備
1．稱取0．5克枸櫞酸鈉加在10毫升生理鹽水內，分裝試管，15磅20分鍾滅菌後即為5％枸櫞酸鈉生理鹽水，供采血時做抗凝劑用。
2．將采血用的注射器、針頭和鑷子，以及帶棉塞的空試管，離心沉澱管等15磅20分鍾滅菌後，烘幹備用。
3．用家兔血或羊血、人血製備皆可。從家兔心髒采血時，先將其固定在解剖架上，剪去左胸部心髒跳動處的兔毛，並以碘酒棉球充分擦拭消毒後，再用酒精棉球擦去碘酒。然後將滅菌注射器裝好針頭，以無菌手續吸取枸櫞酸鈉抗凝劑約1毫升，穿刺家兔左胸部的肋間抽取心髒血液約
9毫升輕輕混合均勻。待血液不再凝固時，徐徐放入滅菌離心沉澱管中，置離心機上每分鍾1500轉離心沉澱10分鍾。用滅菌吸管將離心管中的無色血漿，輕輕吸至帶棉塞的滅菌試管裏，置冰箱內保存備用。
4．製備好的家兔血漿，用已知血漿凝固酶試驗陽性的金黃色葡萄球菌菌株，按凝固酶試驗法進行測定。經試驗為陽性反應，證明血漿合格，方可用於常規檢驗。
六、細菌實驗室注意事項
1．實驗室應經常保持清潔，嚴禁吸煙和飲食，以免感染。
2．工作人員入室時必須穿戴工作衣、帽。離室時脫去工作衣帽。掛於指定地方，並經常洗滌保持清潔。
3．實驗室桌麵應經常保持整潔，用3％來蘇兒溶液擦拭消毒桌麵。
4．工作人員操作前後或離開實驗室，必須用2％來蘇兒溶液洗手消毒。
5．無菌室應有專用的物品（無菌衣、帽、口罩、膠鞋、臉盆、盆架、毛巾、接種棒、火柴、酒精燈、橡皮乳頭、盛有5％來蘇兒的吸管等）。無菌衣、帽等，應經常高壓消毒。
6．無菌室定期用5％石炭酸蒸氣消毒。定期檢查無菌室雜菌數（在室內打開15分鍾的肉湯瓊脂平板經37°培養48小時左右），3個平板平均雜菌數要求在5個以下，如超過應徹底消毒。
7．無菌室操作前先開紫外燈照射15－20分鍾，操作完應及時清潔無菌室，再用紫外燈照射20分鍾。
8．廢棄培養物應放入消毒桶內，用15磅30分鍾滅菌後洗刷。無菌的實驗用品應浸泡在5％來蘇兒溶液內，24小時後取出衝洗。
9．接種環或接種針每次使用前後，必須通過火焰燒紅滅菌，待冷卻後，方可接種培養物。
10．必須用帶橡皮乳頭的吸管吸取菌液，切勿直接用口接觸吸管。
11．如有菌液撒在桌上或地上，應立即用5％石炭酸或來蘇兒倒在被汙染處至少30分鍾以上，再作處理。
12．凡帶有活菌的物品，必須經消毒後才能在水籠頭下衝洗，嚴禁汙染下水道。
1984年10月31日
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