一、雙歧杆菌屬情況簡要介紹：

  雙歧杆菌屬（Bifidobacterium）是一種革蘭氏陽性、不運動、細胞呈杆狀、一端有時呈分叉狀、嚴格厭氧的細菌屬，廣泛存在於人和動物的消化道、陰道和口腔等生境中。雙歧杆菌屬的細菌是人和動物腸道菌群的重要組成成員之一。

  在1899年，法國巴斯德研究所的兒科醫生Henry Tissier從母乳喂養的健康嬰兒的糞便中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽性杆菌，命名為Bacillus bifidus。隨後，Tissier發現這種分叉狀的杆菌能治療腸道感染方麵的疾病。在Tissier發現雙歧杆菌以後，人們發現了更多的雙歧杆菌屬的成員，人們對雙歧杆菌的生理功能進行了深入的發掘與研究，經過一個世紀的發展，特別是近年腸道微生物組學研究的發展，人們越來越認識到雙歧杆菌的重要性。雙歧杆菌在醫藥、食品等方麵也得到了廣泛的應用。

二、產品用途及檢驗原理：

  該培養基用於食品中雙歧杆菌的分離培養或計數。

  添加劑：每瓶需配套添加8盒HB0384-6a莫匹羅星鋰鹽和2盒HB0384-11a半胱氨酸鹽酸鹽溶液使用。

蛋白腖、牛肉浸粉、酵母浸粉在培養基中作為基礎營養物質提供細菌生長所需的氮源、碳源和其他的生長因子；葡萄糖為可發酵糖類；磷酸氫二鉀為pH緩衝劑；檸檬酸三銨、醋酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳和吐溫80為培養各種乳酸菌提供生長因子，其成分還能抑製某些雜菌並中和細胞毒性物質，為乳酸菌提供一個良好的生長環境；莫匹羅星鋰鹽抑製除雙歧杆菌外的其他乳酸菌的生長；半胱氨酸鹽酸鹽具有降低氧化還原電位的作用，防止過氧化物的積累對某些菌產生毒性，有利於厭氧菌的生長；瓊脂為培養基的凝固劑。

三、培養基配方（g/L）：

四、試驗方法：

  1. 稱取本品66.2g，加熱溶解於1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15-20分鍾，冷至48℃左右，每200mL培養基中加入過濾除菌的莫匹羅星鋰鹽10mg和半胱氨酸鹽酸鹽0.1g，混勻。

  2. 目標菌：10倍梯度稀釋法製備質控菌株菌懸液，吸取適宜梯度的菌懸液傾注接種於待測培養基和參比培養基；

非目標菌：用1µL接種環取選擇性測試工作菌懸液1環，在待測培養基表麵劃六條平行直線。

  3. 放置於恒溫培養箱36℃±1℃厭氧培養48h±2h，觀察試驗結果。

五、試驗結果判斷：

  接種以下質控菌株，放置36℃±1℃厭氧培養48h±2h，試驗結果如圖1所示。

質控菌株	菌株編號	接種量 （CFU）	參比或計 數培養基	方法	生長情況	其他特征
嬰兒雙歧杆菌	CICC 6069	20-200	MRS	定量	PR≥0.7	圓形凸起，邊緣整齊，無色不透明
德氏保加利亞亞種	CICC 6032	/	/	半定量	G≤1	抑製
嗜熱鏈球菌	CICC 6038	/	/	半定量	G≤1	抑製
嗜酸乳杆菌	CICC 6005	/	/	半定量	G≤1	抑製

  質控目標菌（嬰兒雙歧杆菌）在MRS上的計數結果：

  質控菌在改良MRS上的生長情況：

圖1 莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良MRS瓊脂培養基微生物質控結果

六、注意事項

  1. 非目標菌檢驗時，用接種環而不用接種針，接種環應完全浸入培養基中。取一滿環接種物，將接種環接觸容器邊緣3次可去除多餘的液體。劃線時，接種環與瓊脂平麵的角度應為20°~30°。接種環壓在瓊脂表麵的壓力和劃線速度前後一致，整個劃線應快速連續，移取液體培養物時應將接種環伸入培養液下部分以防止環上產生氣泡或泡沫。

  2. 嬰兒雙歧杆菌為厭氧菌，氧氣對其有毒害作用，應在厭氧操作箱中操作，若是在正常環境中操作，從厭氧菌暴露在空氣中開始到放入厭氧環境中培養結束，整個過程應盡可能快速操作，一般不超過15分鍾，暴露時間越長，厭氧菌越容易死亡。

  厭氧菌培養相關信息可參考原創文章：專性厭氧菌的培養方法及注意事項-點擊查看。

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