一、試驗用途及原理:
該培養基用於腸球菌的選擇性分離培養。
蛋白腖、胰酪蛋白腖和酵母粉提供微生物生長所需的碳氮源、維生素和生長因子;牛膽粉可以抑製大部分革蘭氏陽性菌的生長;氯化鈉維持培養基均衡的滲透壓;有些細菌可將七葉苷分解為葡萄糖與七葉素,七葉素與檸檬酸鐵銨中鐵離子反應形成黑色的6,7-二羥基香豆素;疊氮化鈉主要抑製革蘭氏陰性細菌的生長,對變形杆菌抑製效果非常顯著;檸檬酸鈉可抑製腸道菌的生長;瓊脂是培養基的凝固劑。
二、培養基配方(g/L):
蛋白腖 |
3.0 |
胰酪蛋白腖 |
17.0 |
酵母粉 |
5.0 |
牛膽粉 |
10.0 |
氯化鈉 |
5.0 |
七葉苷 |
1.0 |
檸檬酸鐵銨 |
0.5 |
疊氮化鈉 |
0.25 |
檸檬酸鈉 |
1.0 |
瓊脂 |
13.5 |
pH值7.1±0.2(25℃) |
三、試驗方法:
1. 稱取本品56.25g,加熱煮沸完全溶解於1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鍾,傾入無菌平皿,備用。
2. 10倍梯度稀釋法製備質控菌株菌懸液,吸取適宜梯度的菌懸液塗布接種於待測培養基和參比培養基上。
3. 放置於恒溫培養箱35℃±2℃需氧培養24h±2h,觀察試驗結果。
四、試驗結果判斷:
接種以下質控菌株,放置於35℃±2℃需氧培養24h±2h,試驗結果如圖1所示。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
參比或計數培養基 |
方法 |
生長情況 |
其他特征 |
糞腸球菌 |
ATCC 29212 |
10-100 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
褐色菌落,菌落周圍變黑 |
屎腸球菌 |
ATCC 27270 |
10-100 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
褐色菌落,菌落周圍變黑 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
100-1000 |
TSA |
定量 |
- |
抑製 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
100-1000 |
TSA |
定量 |
- |
抑製 |
質控菌在TSA上的計數結果:
質控菌在疊氮鈉-七葉苷瓊脂上的生長情況:
圖1 疊氮鈉-七葉苷瓊脂培養基微生物質控結果
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