聚乙二醇(PEG)和多聚賴氨酸等是協助DNA轉移的常用多聚物,尤以PEG應用最廣。這些多聚物與二價陽離子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+等)及DNA混合後,可在原生質體表麵形成顆粒沉澱,使DNA進入細胞內。
這種方法常用於酵母細胞以及其他真菌細胞,也可用於動物細胞。處於對數生長期的細胞或菌絲體用消化細胞壁的酶處理變成球形體後,在適當濃度的聚乙二醇6000(PEG6000)的介導下就可將外源DNA導入受體細胞中。
將外源基因導入哺乳動物細胞還可以采用磷酸鈣或DEAE-葡聚糖介導的轉染法。這是一種進行瞬時表達的常規方法。哺乳動物細胞能捕獲黏附在細胞表麵的DNA-磷酸鈣沉澱物,並能將DNA轉入細胞中,從而實現外源基因的導入。
在實驗中,先將重組DNA同CaCl2混合製成CaCl2-DNA溶液,隨後加入磷酸鈣形成 DNA-磷酸鈣沉澱,黏附在細胞表麵,通過細胞的內吞作用進入受體細胞,達到轉染目的。
DEAE(二乙胺乙基葡聚糖)是一種高分子多聚陽離子材料,能促進哺乳動物細胞捕獲外源DAN分子。其作用機製可能是DEAE與DNA結合後抑製了核酸酶的活性,或DEAE與細胞結合後促進了DNA的內吞作用。
脂質體(liposome)是人工構建的由磷脂雙分子層組成的物質,成膜狀結構。在形成脂質體時,可把用來轉染的目標DNA分子包在其中,然後將該種脂質體與細胞接觸,就將外源DNA分子導入受體細胞。脂質體介導法的原理是:受體細胞的細胞膜表麵帶負電荷,脂質體顆粒帶正電荷,利用不同電荷間引力,就可將DNA、mRNA及單鏈RNA等導入細胞內。
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