將抗生素生產菌經誘變處理後篩選出失去生產能力的突變株，如果生產能力的喪失是一次突變的結果，往往意味著抗生素生物合成途徑中的某一種酶已經失活，這樣的突變株稱為阻斷突變株。由於酶失活，使生物合成不能繼續，中間代謝產物就會積累並被分離提純。關鍵問題是要確認它的確是抗生素合成的中間代謝產物，為此也必須借助於放射性標記技術。在培養阻斷突變株的培養基中加人放射性標記的前體，就可以得到有放射性標記的中間代謝產物，然後將它加到抗生素生產菌種的培養基中，如果結合到抗生素分子中的帶有放射性標記中間產物的比例很高，就可以證明該物質是抗生素代謝途徑的中間產物。另外一種方法是在不加營養物質的懸浮細胞培養時，如果加人了中間產物後能夠提高抗生素產量，也可以間接證明該物質確實是中間代謝產物。
那麽，怎樣確定突變株隻經過一次突變呢?如果將兩個突變株放在一個搖瓶中進行混合培養並與它們的單獨培養進行比較，如果其中的一個突變株單獨培養時不產中間代謝產物而混合培養時能檢測到，則說明該菌株可能經曆了兩次突變；而一起培養的另一菌株則具有積累中間代謝產物的能力，從而證明它隻經曆了一次突變。如果混合培養時一個突變株產生的中間代謝產物被另一個突變株消耗，則可以通過將其中一個突變株單獨培養的培養液加到另一突變株的培養液，看該突變株是否能恢複抗生素生產，如果是的話，就可證實後者具有積累中間代謝產物的能力。
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