變形杆菌屬是常見的腸杆菌科細菌之一,其為革蘭氏陰性菌,有鞭毛,無莢膜,無芽孢,運動活潑。與臨床和食品檢驗較為密切的為普通變形杆菌與奇異變形杆菌。在固體培養基表麵常擴散生長,最終形成遷徙生長的現象。
普通變形杆菌CMCC(B)49027在TSA平皿上的遷徙生長
遷徙生長是指細菌在固體培養基上呈擴散性生長,形成以細菌接種部位為中心的厚薄交替,同心圓型的層層波狀菌苔。
因為變形杆菌的遷徙生長現象,使得在劃線分離變形杆菌的過程中,很難分離出變形杆菌的單菌落。同時,若檢測樣品汙染了變形杆菌,則很容易出現變形杆菌菌苔包圍了其他細菌單菌落,出現分離其他細菌單菌落困難的現象。
遷徙生長導致菌落分離困難
方法:
1.使用含有膽鹽的瓊脂
含有膽鹽、脫氧膽酸鹽的培養基可以抑製變形杆菌的遷徙生長,且膽鹽對革蘭氏陽性菌有抑製作用。適合用來分離各種革蘭氏陰性菌。常用的含膽鹽培養基有麥康凱瓊脂、HE瓊脂、SS瓊脂等。
普通變形杆菌和奇異變形杆菌在HE瓊脂和SS瓊脂上形成單菌落,無遷徙生長現象。同時各種不同的顯色反應也可以分辨變形杆菌和其他革蘭氏陰性菌。
2.在培養基中添加0.4%硼酸
以TSA為例,在配製時向TSA中添加0.4%的硼酸,121℃滅菌15min後倒平皿。劃線接種普通變形杆菌,奇異變形杆菌。同時劃線接種大腸杆菌,沙門氏菌,普通變形杆菌的混合菌液。
在36℃需氧培養18小時後,觀察結果。
可以看出培養基添加硼酸後抑菌性很強,18小時後隻有一區生長,變形杆菌可以形成單菌落。延長培養時間後,可觀察到二區三區生長,出現單菌落。但此方法需要培養時間較長,容易導致培養基失水,且硼酸具有抑菌性,可能會使目標菌不生長。
3.含0.1%苯酚TSA
以TSA為例,在配製時向TSA中添加0.1%的苯酚(石碳酸),121℃滅菌15min後倒平皿。劃線接種普通變形杆菌,奇異變形杆菌。同時劃線接種大腸杆菌,沙門氏菌,普通變形杆菌的混合菌液。
在36℃需氧培養18小時後,觀察結果。
觀察結果時可以發現本平皿抑菌性很強,一區微弱生長出單菌落,延長培養時間後可見二三區出現單菌落。苯酚作為抑菌成分,可能會使目標菌不生長,同時苯酚對人體具有毒性,具有刺激性氣味。因此筆者不推薦使用此方法。
4.95%乙醇
在普通TSA平皿表麵,傾倒適量95%乙醇。在整個培養皿表麵都接觸酒精後,將酒精倒出,使用超淨工作台吹風將平皿表麵吹幹。劃線接種普通變形杆菌,奇異變形杆菌。同時劃線接種大腸杆菌,沙門氏菌,普通變形杆菌的混合菌液。
在36℃需氧培養18小時後,觀察結果。
可以看到此法有一定效果,但不能顯著抑製其遷徙生長,在短時間培養時,可以在三區分離出單菌落。當延長培養時間後,變形杆菌仍會遷徙生長蔓延整個培養基表麵。相對而言,本法較為簡單,也具有一定的效果,從混合接種的結果來看,對本次混合的菌種並無抑製作用。
普通變形杆菌CMCC(B)49027
奇異變形杆菌CMCC(B)49005
5.使培養基含有10%瓊脂
以TSA為例,在配製時,加入10%含量的瓊脂。121℃滅菌15min後倒平皿。劃線接種,36℃培養18h後觀察結果。
從結果來看,變形杆菌可以形成單菌落,且延長培養也不會讓其遷徙生長。但是此法弊病較多。首先,商業培養基一般添加1.5%的瓊脂,過高的瓊脂含量,會使得培養基硬度過大,影響菌落形態。其次,添加瓊脂過多,極易在加熱和滅菌過程中出現糊鍋的情況。且最終狀態過於粘稠,流動性很差,本次試驗倒平皿時,培養基呈蜜糖狀,很難控製倒出的培養基量。
6.調整培養基中氯化鈉含量
在配製培養基時,可以調整培養基中的氯化鈉含量。本次試驗以無鹽TSA以及甘露醇氯化鈉瓊脂(氯化鈉含量7.5%)為例。劃線接種36℃需氧培養18h後觀察結果。
無鹽TSA以及甘露醇氯化鈉瓊脂上,變形杆菌均不遷徙生長。在甘露醇氯化鈉瓊脂上,變形杆菌呈針尖大小。若樣本的目標菌是金黃色葡萄球菌,變形杆菌為幹擾菌,則推薦使用甘露醇氯化鈉瓊脂(或B-P瓊脂)。
在無鹽TSA上,變形杆菌菌落較甘露醇氯化鈉瓊脂上大。但是現在商品化培養基一般均添加了氯化鈉成分,若需要無鹽瓊脂,則多數情況下需要定製或自己使用原料配製,使用不方便。
7.微需氧/厭氧環境下培養
將變形杆菌點種至TSA平皿,36℃微需氧培養18h後,觀察結果。
在微需氧環境中,變形杆菌仍會出現遷徙生長的現象。
將變形杆菌劃線接種TSA平皿,36℃厭氧培養18h後,觀察結果。
在厭氧培養的條件下,普通變形杆菌仍有輕微的遷徙生長,奇異變形杆菌則無遷徙生長的現象。
奇異變形杆菌CMCC(B)49005無遷徙生長現象
普通變形杆菌CMCC(B)49027
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