一、生孢梭菌簡介
生孢梭菌（Clostridium sporogenes）為梭狀芽孢杆菌屬，嚴格厭氧，對氧氣敏感，生長後有很強的惡臭味，觸酶陰性，在中國藥典及國外的藥典標準中常用於培養基的靈敏度及適用性檢驗。
二、活化方法
1.硫乙醇酸鹽流體培養基（FTM）：在藥品的檢驗中常用FTM進行厭氧菌的檢驗，生孢梭菌可以使用FTM進行活化和培養，在氧化層以下生長，初期生長呈顆粒狀或條狀生長，後期呈渾濁狀生長。
注：生孢梭菌在FTM培養基中活化成功後，應及時進行轉接或保存，兩天以後生孢梭菌會逐漸死亡和自溶。
2.庖肉培養基：配製時可在培養基表麵覆蓋約7mm厚的液體石蠟隔絕空氣，滅菌後接種生孢梭菌，無需厭氧設備即可培養，36℃培養24-48h。
3.血平板/哥倫比亞瓊脂：將生孢梭菌的凍幹粉溶解後塗布至血平板或哥倫比亞瓊脂平板（若采用瓷珠或甘油保存法，同樣接種至平板即可），迅速放入厭氧培養袋或厭氧培養箱中36℃培養24-48h，生孢梭菌呈淡黃色不規則菌落，並有惡臭味。
注：生孢梭菌接觸氧氣容易死亡，因此在進行平板培養時應在厭氧操作箱內進行，使用的平皿應保持良好的透氣性，確保平皿與厭氧環境氣體流動，不可使用封口膜纏繞平皿，若平皿內殘留氧氣，極易容易培養失敗。
三、實驗室保存及複蘇方法
長期保存：普通實驗室可使用甘油法或脫脂牛奶進行超低溫冷凍保存，將培養好的生孢梭菌轉接至液體菌種保存管或脫脂牛奶菌種保存管中（盡可能挑取較多菌苔），用移液槍吹打分散均勻，置-80℃超低溫冰箱或液氮罐中冷凍保存，至少可存活兩年以上。複蘇時，取出菌種保存管，快速解凍，將菌液加入至硫乙醇酸鹽流體培養基/庖肉培養基或塗布至血平板/哥倫比亞瓊脂平板36℃厭氧培養24-48h。
短期保存：將生孢梭菌活化至庖肉培養基中，置於2-8℃冰箱中冷藏保存，生孢梭菌可存活數月，活化時吸取少量菌液轉接至硫乙醇酸鹽流體培養基/庖肉培養基或塗布至血平板/哥倫比亞瓊脂平板36℃厭氧培養24-48h。
四、菌懸液的製備及使用
進行培養基的靈敏度檢查時，可用0.1%蛋白腖水或pH7.0氯化鈉緩衝液快速將生孢梭菌製成10倍稀釋係列菌懸液，立即使用，此操作建議在厭氧操作箱內進行。若在空氣中操作，從稀釋菌液置接種結束轉入厭氧環境培養，整個過程時間宜控製在15min之內。
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