1、定義及特點
萊氏無膽甾原體屬於支原體的一種，是最常見的汙染細胞培養的支原體菌群之一。細胞培養中常見的支原體有口腔支原體、精氨酸支原體、萊氏無膽甾原體、豬鼻支原體、肺炎支原體和發酵支原體，其中前四者占據支原體汙染的絕大比例，萊氏無膽甾原體為牛源性。
支原體是一種大小介於細菌和病毒之間，並獨立生活的原核微生物，廣泛存在於人和動物體內，隻有個細胞膜而沒有細胞壁，它不容易受到β-內酰胺傳染，不被革蘭氏染液染色，單體呈現為多形態（呈現多種形狀，從球菌形到棒狀，到細絲），大小不一，從0.2μm到0.3μm或更小。萊氏無膽甾體被發現可以穿過0.2μm濾膜，但會被0.1μm過濾器截留，其一般會存在於動物來源物料中，以及通常由動物來源製備的微生物培養基中，支原體的環境監控需要采用選擇性培養基（PPLO肉湯或瓊脂）。
大部分支原體繁殖速度比細菌慢，適宜生長溫度為35℃，適合於偏堿條件下生存（pH7.6—8.0），對酸耐受性差，對75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。對熱比較敏感在細胞培養過程中如果在顯微鏡下發現破碎的細胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養的時候，即應懷疑支原體汙染。
2、檢測及鑒定方法：
（1）分離培養法
支原體的病原學檢測主要是從被汙染的細胞、雞胚中分離培養出支原體來確定，分離培養法是檢測支原體汙染中最為可靠準確的方法。但是支原體對環境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養操作相對繁瑣，所需時間較長，因此隻能夠對支原體汙染進行定性觀察。分離培養法在常規的支原體檢測中多用於輔助其它檢測方法。
（2）DNA熒光染色法
DNA熒光染色法較分離培養法縮短了檢測周期，主要用於細胞培養中汙染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結合支原體DNA中的A-T堿基富集區域的原理，被支原體汙染的細胞經染色後，其細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一的熒光點，即是富含A-T堿基區域的支原體DNA。
（3）PCR技術
PCR根據支原體基因組內的保守序列設計特異引物，對待檢樣品的核酸進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術用於支原體汙染的檢測，快速、靈敏、特異且簡便，應用於科學研究和疾病的診斷。
（4）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
ELISA用於支原體汙染的檢測中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測。
（5）電鏡
一般在細胞培養48～72小時，細胞接近匯合前，用胰酶消化細胞製成細胞懸液後進行固定、包埋、切片後才能進行觀察。
（6）定期檢測
支原體感染會使培養細胞慢慢枯萎，因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規化堅持下去，是細胞培養實驗室應對支原體感染的關鍵。
3、支原體汙染的嚴重性
（1）細胞外形可以沒有明顯的變化，支原體可以與細胞共存，汙染後細胞液不會死亡，培養基一般不發生渾濁；
（2）使用被支原體汙染的細胞做實驗會嚴重影響實驗的結果，因為支原體會抑製細胞生長；導致染色體畸變；細胞膜抗原性改變；細胞複蘇後存活率降低等。
（3）影響細胞的代謝和功能：培液中的精氨酸被支原體大量消耗，引起細胞蛋白質、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙；支原體活動使培液成分發生改變（如發酵型支原體降解糖類產生酸性物質），影響細胞代謝。
（4）培養過程中細胞破碎較多，培養基pH變化明顯，需要頻繁更換新鮮培養基；
（5）細胞被支原體汙染後會形成共生體係導致汙染不斷擴大。
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