一、配製培養基時的注意事項
1.培養基在滅菌前，需進行加熱溶解（含瓊脂的培養基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解），再進行分裝滅菌（應不超過1000mL）；
2.含瓊脂培養基，若滅菌前未進行加熱溶解，滅菌後需充分搖勻使用；
3.所有培養基不宜滅菌過度和長時間保溫，特別是含糖量高的培養基，如沙氏葡萄糖瓊脂，滅菌過度或保溫時間過長易使葡萄糖發生焦化，滅菌後的培養基顏色會變深，pH會下降，此外還會使蛋白腖中的維生素分解，降低培養基的營養；
4.需另加添加劑的培養基通常在培養基冷卻至50℃左右時加入，已加入添加劑的瓊脂類培養基不可熔化再次使用；
5.配製好的培養基需及時滅菌，不可久置；
6.培養基不可重複滅菌；
7.瓊脂培養基不可反複熔化使用；待用的瓊脂培養基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫，一般不可超過4小時。
8.使用蒸餾水或純化水配製。飲用水或自來水中由於含礦物鹽離子，配製培養基會產生渾濁現象。
9.容器不易過滿，容量至少應比培養基體積大20%。
二、配製過程中的常見問題分析
1、培養基顏色不正確
（1）含有酸堿指示劑的培養基，若顏色不正確，通常是由於pH不正確導致的，加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導致此項問題。
（2）加熱過度導致某些成分分解或糖焦化，如SC培養基加熱過度會變紅，含糖量高的培養基，加熱過度通常會出現顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。
（3）某些成分變質，如血液久置易變黑，製成的平板顏色偏棕黑色。
2、培養基不凝固或凝固性差
（1）稱量錯誤
（2）瓊脂分布不均勻
（3）培養基pH不正確
（4）加熱過度
（5）瓊脂量不足
滅菌前未加熱溶解，滅菌後未充分搖勻，
會出現分層現象，瓊脂凝固在底層，上層不凝固
3、培養基產生沉澱
（1）某些培養基原本就含有不溶性沉澱，如TTB，MC培養基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。
（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養基中含有大量磷酸鹽，若滅菌前溶解不充足，滅菌後就會出現大量沉澱。
（3）pH不正確，偏酸或偏堿都有可能使培養基中的部分金屬離子產生沉澱。
（4）水的純度不夠，天然水中含有較多的礦物鹽離子，若未除淨，則易與培養基中的磷酸鹽反應生成沉澱。
（5）添加劑加入溫度不正確，卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分，若加入時溫度過高或溫差過大，易出現凝塊。
（6）稱量錯誤。
（7）試劑加入順序不正確。
4、培養基汙染
（1）滅菌方式不正確，導致滅菌不徹底
（2）滅菌鍋的滅菌效力不達標
（3）滅菌量過多，滅菌前未加熱溶解
（4）培養基本身含耐熱菌較多
（5）滅菌過程中，滅菌鍋內冷空氣未排幹淨
（6）滅菌鍋放置過滿
（7）操作過程發生汙染
（8）分裝培養基器皿滅菌不充分
（9）濾膜破損
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