微生物分離純化方法
錄入時間:2023-3-9 10:50:17
來源:青島betway必威西汉姆联生物
常見的微生物分離純化方法有稀釋混合倒平板法、平板劃線法、稀釋塗布法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備,分離純化效果好。
平板劃線法與稀釋塗布平板法的區別
一、平板劃線分離法
用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料,在無菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線,微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少,並逐步分散開來,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經培養後,可在平板表麵得到單菌落。
用途:一般多用於菌種的純化;
優點:可以觀察菌落特征,對混合菌進行分離;
缺點:不能計數;
二、稀釋塗布平板法:
稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。計數時,首先將待測樣品製成均勻的係列稀釋液,盡量使樣品中的微生物細胞分散開,使成單個細胞存在(否則一個菌落就不隻是代表一個細胞),再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布於平板中的培養基內。經培養後,由單個細胞生長繁殖形成菌落,統計菌落數目,即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數,故又稱活菌計數。一般用於某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物製品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的汙染程度的檢驗。
用途:一般多用於篩選菌株。一般用於平板培養基的回收率計數。
優點:可以計數,可以觀察菌落特征。
缺點:吸收量較少,較麻煩,平板不幹燥效果不好,容易蔓延。如果菌液密度大的話,長不出單菌落。
a. 樣品稀釋液的製備
(1)將分別盛有9mL無菌生理鹽水的試管,進行編號。
(2)準確稱取待測樣品10g,放入裝有90mL無菌水並放有小玻璃珠的250mL三角瓶中,用手或置搖床上振蕩20 min,使微生物細胞分散,靜置20s-30s,即成10-1稀釋液;
(3)用移液槍吸取10-1稀釋液1mL,移入裝有9 mL無菌水的試管中,吹吸3次,讓菌液混合均勻,即成10-2稀釋液;
(4)再吸取10-2稀釋液1mL,移入裝有9mL無菌水的試管中,也吹吸三次,即成l0-3稀釋液;以此類推,連續稀釋,製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一係列稀釋菌液。
用稀釋平板計數時,待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時,稀釋度應高,反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時,采用10-7、10-8、10-9稀釋度;測定土壤細菌數量時,采用10-4、10-5、10-6稀釋度;測定放線菌數量時,采用l0-3、10-4、10-5稀釋度;測定真菌數量時,采用10-2、10-3、10-4稀釋度
b.塗布操作:
(1) 將塗布器浸在盛有酒精的燒杯中。
(2) 取少量菌液(不超過0.1ml)滴加到培養基表麵。
(3) 將沾有少量酒精的塗布器在火焰上引燃,待酒精燃盡後,冷卻8~10s。
(4) 用塗布器將菌液均勻地塗布在培養基表麵,塗布時可轉動培養皿,使菌液分布均勻。
注意:將塗布器末端浸在盛有體積分數為百分之七十的酒精的燒杯中。取出時,要讓多餘的酒精在燒杯中滴盡,然後將沾有少量酒精的塗布器在火焰上引燃。
上一篇:孔雀綠、克菌丹瓊脂
下一篇:噬菌體的汙染與防治措施