1 方法來源
ChinaPIN-2022-TZFX019《國家致病菌識別網技術手冊肺炎克雷伯菌》
2 適用範圍
本程序規定了食品中肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）的檢驗方法。
3 培養基和試劑
3.1 磷酸鹽緩衝液（PBS）點擊查看
3.2 麥康凱培養基 點擊查看
3.3 血平板 點擊查看
第一法 定性檢驗
4 檢驗程序
肺炎克雷伯菌檢驗程序見圖1。
圖1 肺炎克雷伯菌檢驗程序
5 操作步驟
5.1 增菌
以無菌操作取樣品25g（mL）加入到含有225mL PBS緩衝液 的均質袋中，在拍擊式均質器上連續均質1min～2min；或放入盛有225mL PBS緩衝液的均質杯中，8000r/min～10000r/min均質1min～2min。於36℃±1℃培養8h~18h。
5.2 分離
取PBS增菌液劃線接種於麥康凱平板上，於36℃±1℃培養24h～48h，觀察各個平板上生長的菌落。肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上形成淡粉色菌落，大而隆起，光滑濕潤，呈粘液狀（圖2），48小時候相鄰菌落易融和成膿汁樣（圖3）。
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圖2 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養24小時 |
圖3 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養48小時 |
自麥康凱平板上分別挑取3個～5個典型或可疑菌落，分別接種在血平板上純化，於36℃±1℃培養24h～48h。肺炎克雷伯菌在血平板形成白色或略透明大菌落（圖4），48h後易融合成片，形成膠水樣菌苔（圖5），不溶血，無特殊氣味產生。
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圖4 肺炎克雷伯菌在血平板上培養24小時 |
圖5 肺炎克雷伯菌在血平板上培養48小時 |
肺炎克雷伯菌經革蘭氏染色後在鏡下呈現較短粗的革蘭氏陰性杆菌，單獨、成雙或短鏈狀排列，大小約為0.3μm～1.5μm×0.6μm～6μm。無芽胞，無鞭毛（圖6）。
圖6 肺炎克雷伯菌的鏡下形態特征（革蘭染色×1000）
5.5 鑒定
5.5.1 生化鑒定：常見的微生物生化鑒定係統，如VITEK 2（用GN卡）、BD-Phoenix100生化儀、生物梅裏埃公司生產的API生化鑒定試劑條等均可鑒定肺炎克雷伯菌。
5.5.2 微生物質譜鑒定：目前常見的微生物質譜儀均能很好地鑒定肺炎克雷伯菌。
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