中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
微生物技術資料
文章檢索

含酶TSA平板效果驗證試驗

王娟
錄入時間:2023-2-2 14:06:27 來源:青島betway必威西汉姆联生物

一、培養基的應用

  GMP生產車間進行沉降菌檢測時,有些環境下會殘留抗生素類抑菌成分,汙染至測沉降菌的平板上,對沉降菌的生長產生抑製效果,導致監測結果不準確。因此,對此類環境沉降菌進行監測時,通常使用加入相應的酶類TSA平板,以消除殘留的抗生素的影響。


二、驗證方法

  進行方法驗證之前,首先要確認沉降菌的每皿抗生素殘留量最大值為多少,驗證時可按照此最大值的120%濃度進行測試。

  例:某車間測定沉降菌時,9cm平皿測試沉降菌時,殘留的青黴素最大量為0.5mg/皿,現有含青黴素酶的TSA平皿(每皿含青黴素酶2萬單位),測定此平皿是否能消除殘留的青黴素的影響。

  試驗方法:

  (1)選用金黃色葡萄球菌為測試菌株,活化後用生理鹽水梯度稀釋至適宜濃度;

  (2)將青黴素的標準樣品稀釋至適宜濃度,過濾除菌;

  (3)製成編號1和2含金黃色葡萄球菌濃度相同的菌懸液(含菌量為10-100CFU/mL),2號菌懸液同時含青黴素6mg/mL;

  (4)準備4組平板,1組為正常的TSA平板(對照組),塗布編號1的菌液0.1mL,2組為正常的TSA平板,塗布編號2的菌液0.1mL,3組為含酶的TSA平板,塗布編號1的菌液0.1mL,4組為含酶的TSA平板,塗布編號2的菌液0.1mL,將接種後的平板置35℃培養24-48h,計數。

(左)菌數為39CFU,實驗組2(右)無菌生長

試驗組1(左)菌數為39CFU,實驗組2(右)無菌生長

(左)菌數為38CFU,實驗組4(右)菌數為32CFU

試驗組3(左)菌數為38CFU,實驗組4(右)菌數為32CFU

  結果分析:

  1組生長良好,2組無菌生長,說明加入的抗生素是有效的,3組與1組相比,菌數一致,說明含酶的培養基本身是合格的,沒有抑菌性,4組與1組相比,菌數基本一致(比值在0.5-2之間),說明培養基中的酶可消除0.6mg/皿的青黴素的抑菌效果。

  試驗其他結果分析及改進:

  (1)若試驗組2出現部分菌落生長,說明抗生素抑菌效果不高或者該菌對此抗生素效果不夠敏感,可以擴大測試菌株範圍或使用敏感菌株;

  (2)若試驗組3的菌數比試驗組1明顯偏少,可能培養基的質量存在問題。在確認培養基的質量沒有問題的情況下,試驗組1和3隻做一組即可做為對照;

  (3)若試驗4組菌數明顯偏少或不生長,說明培養基並沒有消除抗生素的抑製效果,需加大酶的用量或選用其他合適的酶進行測試。


注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。

 

上一篇:大腸杆菌、大腸菌群、糞大腸菌群的定義與區分

下一篇:兩種β-半乳糖苷酶的測定方法

相關文章:
首頁 | 關於我們 | 網上商城 | 在線客服 | 聯係我們
業務聯係電話
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
郵箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青島市城陽區錦匯路1號A2棟
產品技術谘詢
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它時段:13105190021
投訴與建議:13105190021 13006536294