使用化學消毒劑的目的是將環境中的微生物殺滅或降低其在環境中的汙染程度。因此在長期使用化學消毒劑時，應製定清潔和滅菌的標準操作規程，並定期進行驗證，以確證清潔與滅菌的有效性。由於消毒劑的殺菌結果會受到被消毒表麵的類型與被消毒物的接觸時間以及相關設施中的微生物種群影響，每個使用者都應對消毒劑在不同的使用條件下的消毒效果進行評價。
1. 驗證前的考慮因素
a) 基於消毒劑本身的消毒能力進行設計及評價；
b) 基於生產和實驗室環境生物真實負載進行設計及評價；
c)驗證內容應包括消毒條件、方法、所用介質、消毒劑濃度、消毒時間、消毒劑的交替使用等;
d)選擇合適的試驗方案；
e)所有的規程、方法和結果均要形成文件，以提供一個完整的驗證項目的永久性書麵記錄。
2.製定驗證方案
驗證方案應闡明驗證的目的、驗證的內容和原因；應詳盡把整個驗證的每一個部分落實到具體的部門和個人；應說明取樣方法（包括取樣數證和取祥點）以及測試方法；“合格標準”必須有限定範圍，包括如結果超越限度時如何進行調查和糾正的方法。
3.空氣消毒效果的微生物監測
(1)采樣時間
在消毒處理後、操作前進行。
(2)采樣方法
采樣前．關好門窗．在尤人走動的情況下．靜止10min進行采祥。室內麵積≤30m2．對角線內、中、外設3點，內、外點布點部位距牆壁1m處；室內而積＞30m2，設4角及中央5點、4角的布點部位距牆壁1m處。
將營養瓊脂平板(9cm)放在室內各采樣點處．采祥竊度為距地而0. 8m~1.5m。采樣時．將平板蓋打開，暴露5min．蓋好平板．將平板賞於36°C士1°C恒溫箱培養48h，計數菌落數．並分離致病菌。
(3)檢測方法: 平板暴露法
(4)結果計算見式(5-1):
式中：
A——平板麵積，cm2；
T——平板暴露時間，min；
N——平均菌落數，CFU/平皿；
(5)結果判定
參見 GB15982一2012《醫院消毒衛生標準》和 WS/T367—2012《醫療機構消毒技術規範》Ⅰ類區域：細菌總數10CFU/m3，並且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅱ類區域：細菌總數 200CFU/m3，並且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅲ類區域：細菌總數500CFU/m3，並且未檢出致病菌為消毒合格。
4.手和皮膚黏膜消毒效果監測
(1)采樣時間
在消毒後立即采樣。
(2)采樣方法
①手的采祥：被檢人五指並攏．用沒有含相應中合劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈麵從指根到指端往返塗擦2次（一隻手塗擦麵積約30cm2，並隨之轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10mL含相應中合劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。
②皮膚黏膜采樣：用5cmX5cm的標準滅菌規格板，放在被檢皮膚處．用浸有含相應中 合劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返塗擦各5次，並隨之轉動棉拭子，剪 去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10mL含相應中合劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。 不規則的黏膜皮膚處可用棉拭子直接塗擦采樣。若表麵不足5cmX5cm，可用相應麵積的規格板采樣。
(3)檢測方法
①細菌菌落總數檢測：將采樣管在混勻搖上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0mL待檢樣品接種於滅菌平皿．每一樣本接種2個平皿，加入已熔化的45℃~48℃的營養瓊脂15mL~18mL．混勻後，於36℃±1℃培養48h，計數菌落數。結果計算方法見式(5-2)。
②致病菌檢測：金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和溶血性鏈球菌按相關標準執行。
(4)結果判定
菌落總數≤CFU/m2並未檢出致病菌為消毒合格。
5.物品和環境表麵消毒效果的監測
(1)采祥時間
在消毒後4h內進行采樣。
(2)采樣麵積
被采表麵<100cm2，取全部表麵；被采表麵≤100cm2，取100cm2。
(3)采樣方法
用10cmX10cm的標準滅菌規格板．放在被檢物體表麵，用沒有含相應中合劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返塗擦各5次．並隨之轉動棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10mL含相應中合劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。 不規則的物體表麵可用棉拭子直接塗擦采樣。
(4)檢測方法
①細菌菌落總數檢測：按“手和皮膚黏膜消毒效果監測”執行；
②致病菌檢測：金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和溶血性鏈球菌按相關標準執行。
(5)結果判定
菌落總數≤5CFU/m2，並未檢出致病菌為消毒合格。
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