TTC:俗稱紅四氮唑,學名2,3,5-三苯基氯化四氮唑,化學式如下:
在菌落總數的檢測時,經常添加這種物質,可以起到兩方麵的作用:
其一,可以使菌落顯紅色,便於區分菌落和雜質,更利於計數;
其二,可以有效的防止平板上的菌落蔓延情況。
這兩種作用的原理是不同的,TTC溶於水是無色的,而嗜中溫性需氧菌在新陳代謝過程中產生的琥珀脫氫酶可以使無色的TTC被還原成紅色的TPF,使菌落顯色,這是顯色的原理;同時TTC還具有抑製某些革蘭氏陽性菌生長的作用,因此會防止菌落蔓延。但既然會抑製細菌的生長,那會不會造成檢測誤差呢?其實隻要合理使用,注意添加量,對檢測結果的影響並不是很大,是可以忽略不計的。
有專家對此做過實驗,實驗結果表明培養基內TTC濃度在0.0003%-0.001%(w/v)的範圍內對菌落生長抑製作用不顯著,但濃度太低菌落的顯色效果並不是很好,因此推薦大家按照TTC濃度為0.0005%的量來添加就不會對檢測結果產生較大影響,還會使菌落顯色方便計數。為了方便大家在檢測過程中方便添加,小編特意做了一個表格,方便大家查詢:
除了添加量之外,在使用我們還應該TTC過程中我們還應該注意些什麽呢?
要點一:TTC的配製過程,一定要在無菌條件下進行。因為我們配製好的TTC溶液在檢測時是直接加入到培養基中的,必須保證TTC溶液時無菌的,配製用水也必須是無菌水。
要點二:TTC具有比較強的光敏性,見光易分解,因此無論是TTC粉末還是配製好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存,配製好的溶液一定要放在棕色的試劑瓶裏。
要點三:TTC溶液要在檢測過程中直接加入滅菌完的培養基中,即在傾倒平皿之前加入培養基然後搖勻使用。盡量不要將TTC溶液加入培養基後一起滅菌,這樣操作會使培養基顏色加深,不利於顯色和計數。
要點四:若顯色效果不是很好,可以考慮提高一下TTC濃度,但不要超過0.001%的濃度,否則會使檢測結果出現比較大的偏差。
要點五:加TTC溶液還可以有效的控製平板上的菌落蔓延情況,若是添加試劑的主要目的是為了控製菌落蔓延,建議增加培養基中TTC的濃度,濃度大約0.0008%時就會起到比較好的效果,並且不會影響結果。
任何方法都會是雙刃劍,添加TTC顯色當然也是如此,添加TTC最主要的問題就是它的抑菌作用,會造成檢測結果偏低,因此很多人不願使用。其實若是不存在雜質幹擾或者一些特殊情況可以比較精確的計數,小編也建議大家不要一昧因為顯色之後容易計數就進行添加,畢竟這隻是在一些特殊情況下采用的非常規手段。
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