【原理】
病原微生物進入動物機體後,在引起動物病變的同時,也引起動物機體的免疫反應,產生相應的抗體。注入滅活微生物或亞感染劑量的微生物或微生物的抗原性成分,動物機體也可以產生免疫反應,產生大量的相對應抗體,這些抗體可以在體外與對應的微生物體發生特異結合。當這些抗體標記上熒光素時,與對應微生物特異結合後就可以在熒光顯微鏡下清楚地顯出發熒光的微生物體。
【製法】
(1)根據微生物種的不同,以亞感染量微生物體,或滅活微生物體,或微生物體的抗原成分作為免疫原,按一定的免疫程序(參閱本書37章)注射實驗動物(最常用者為家兔,次為羊,豚鼠、馬等),待抗體效價達到符合要求的程度後,即可采血分離製取抗血清。
(2)從上述抗血清中提取免疫球蛋白G(IgG)。
(3)以熒光素標記上述IgG,然後分離純化簽定,製成抗各種微生物或其抗原成分的熒光抗體。
【用途】
主要有3種:
(1)以免疫熒光直接染色法檢測各種臨床標本中的病原微生物或其抗原成分以作傳染病的快速診斷，
(2)對微出物純培養物作快速血清學鑒定。
(3)分析微生物的抗原成分。
【注意事項】
1.對抗細菌的熒光抗體，F/P克分子比可以高於2,這樣可以提高光學敏感性。
2.不同微生物要選擇不同的固定方法,以保持抗原性最佳為原則,這樣可以提高免疫學的敏感性。
3.熒光抗體的工作稀釋度要高於染色效價2倍以上,以保證熒光抗體的充分結合和占位,並可縮短染色時間。
4.到目前為止,幾乎所有的病原微生物都已經過免疫熒光染色試驗,效果不完全一樣,尤其對現場標本,關鍵是要針對不同標本,選出最佳處理和染色條件。
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