【原理】
本培養基是以Lombard-Dowell (LD)培養基為基礎加入厭氧菌選擇性的抗生素配製而成。LD培養基的特點是不用硫乙醇酸鈉而用亞硫酸鈉及半胱氨酸作還原劑,不加葡萄糖以消除對某些厭氧菌的致死效應;此外,蛋白腖含量少可減少氨基酸產生的堿性產物;因此,適宜於絕大多數厭氧菌生長,一管中加入的慶大黴素不受高壓滅菌影響,在培養基中比較穩定,可抑製絕大多數需氧與兼性厭氧菌;少量的青黴素可抑製芽孢梭菌生長。第1管培養基在於分離培養臨床標本中最常見的擬杆菌。另一管中含新黴素,在於分離各種厭氧菌,但要注意對某些菌無抑製力。
【成分】
胰腖
5g
酵母浸膏
5g
氯化鈉
2.5g
L色氨酸
0.2g
亞硫酸鈉
0.1g
蒸餾水
1000ml
L半胱氨酸鹽酸鹽
0.4g
1%氯化血紅蛋白
1ml
1%維生素K1酒精溶液
1ml
瓊脂粉
0.7g
【製法】
先將蒸餾水中的基礎成分加熱溶解,再加入溶於5ml的1mol/L NaOH 的0.4g, L半胱氨酸鹽酸鹽、1.0ml1%氯化血紅蛋白溶液(1g溶於1mol/L NaOH20ml,加蒸餾水至100ml)等,加熱溶解,調至pH7.5,121℃滅菌15分鍾,分成兩份,分別加入抗生素,分裝成7ml/管。拔去棉塞,蓋上青黴係小瓶上滅菌的膠帽,趁熱套上小號賽珞羅膠帽待幹燥包封,貯冰箱內保存備用。
【用途】
用作分離培養厭氧細菌。培養基使用前置沸水浴內10分鍾去氧(當天製作則不必),冷至室溫。用75%乙醇消毒管帽,標本用帶7號長針的結核菌素射器每管注入0.2ml左右。垂直置35℃溫箱培養,每天肉眼檢查1次,至第4天不見生長菌落報告陰性結果。如見生長,塗片染色鏡檢,再做耐氧試驗等。
【注意事項】
一般情況下,第1管中生長的革蘭氏陰性多形性杆菌可報告為擬杆菌,第2管中除了能生長擬杆菌外,其它厭氧菌也能生長。見到厭氧生長的菌落,要綜合菌形、產氣、動力、觸酶試驗以及在兩管培養基中對抗生素的敏感性等進行分析判定結果。此種培養基培養法不需要特殊的厭氧培養設備,具有簡便快速節省等優點,適合於一般實驗室使用。
(大連解放軍210醫院 林聽寶供稿)
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