一般培養基製作流程及估計時間
培養皿或試管清洗,烘乾:
以清水或洗潔劑以容器清洗乾淨,再以烘箱烘乾,若時間充裕,亦可以自然晾乾.一般30個培養皿清洗約需15~30分鍾,烘乾約需半小時至一小時.
棉花塞製作(使用培養皿者此步驟省略):
取適量棉花揉成團大小適合試管口,長度需達管口直徑兩倍以上,再以紗布包好.時間難以計算,一個大致可以1分鍾計算.
培養皿或試管滅菌:
將培養皿或試管放入160℃以上烘箱2小時以上加以滅菌.等升溫約需半小時,滅菌完後,需降至80℃以下方可拿出,降溫時間約為1~2小時,降溫速度不可過快,避免玻璃破裂.
培養液配置:
依培養基配方配置溶液,一般一盆培養皿或一管試管,約需10~15ml溶液.
總量少時,為避免水分過度蒸發或沾黏於滅菌容器上,需斟酌加量.
此步驟時間,僅與秤藥技術有關,粉末放入水中,隻要稍微搖散,不要有結塊現象即可.
以高壓滅菌釜將培養液滅菌:
將配好之溶液置入高壓滅菌釜滅菌,以121℃,1.2kg/cm2 放置20~30分鍾左右即可.自開機起至壓力降至0約需1小時以上.
培養液倒入容器:
滅菌完畢,尚不能直接倒入容器,一方麵高溫時,我們很難以手拿著操作,一方麵怕試管或培養皿在快速溫度變化時會破裂.一般約等到40~50℃才將培養液倒入我們所需的容器,最好能在10分鍾內全部倒好.倒入後培養皿很快即會凝固,但試管需等待久一點.
冷卻固化後,進行實驗或放入冰箱暫存:
培養皿培養基需倒置,以避免凝結之水氣汙染.
試管培養基則塞好棉花塞保存,必要時以鋁箔紙包裹.
實驗:
操作前半小時需先以70%酒精擦拭無菌操作台內部,然後開啟送風開關,此時可同時以紫外光燈加強滅菌,但請放置告示牌,避免傷及他人.
【培養基成分】本室目前備有LB固態培養基及LB液態培養基粉末成分如下:
1.LB固態培養基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L,Agar 15g/L
2.LB液態培養基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L
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