甲烷細菌培養基

【原理】

  甲烷細菌是一類嚴格厭氧細菌。其可利用CO₂，和H₂，或乙酸、甲醇等作碳源和能源，可利用無機銨鹽作氮源，還需要若幹微量元素等。據此，配製本培養基時要將培養基中氧氣排除，並將甲烷細菌的這些營養成分分裝在無氧試管中，滅菌後用。

【成分】

a．液磷酸氫二鉀	348mg
磷酸二氫鉀	227mg
氯化銨	500mg
硫酸鎂	500mg
硫酸鐵(FeSO4·7H20)	2mg
氯化鈣(CaCl2·2H20)	250mg
H2/CO2(80/20)0.2Pa	0.2Pa(20℃）或
乙酸鈉	100mmol
甲醇	200mmol
三甲氨	100mmol
瓊脂（液體培養基不加）	20g
氯化鈉	2.25g
刃天青	1mg
碳酸氫鈉	850mg
蒸留水	1000ml
微量元素溶液(b液）	3ml
維生素溶液(c液）	10ml
b．半胱氨酸	300mg/L
c.Na2S.nH2O(n=7-9)	300mg/L

【製法】

  按照配方a準確秤量，磁力攪拌溶解混勻，倒入燒瓶中加熱沸騰使刃青天褪色後，將燒瓶置於冰浴冷卻，同時將無氧的CO₂/N₂(20/80）充入燒內的培養液中，排除其中剩餘的氧15分鍾，然後用26%NaOH溶液調至pH7.0，接著將培養液分裝於無氧小試管中，每管5ml，並在試管氣相部分充人H₂/CO₂(80/20)，立即用膠塞密封，121℃滅菌30分鍾備用。

  b、c液配製：先量取若幹蒸餾水分別放入二隻玻璃中，然後分別充入無氧N₂10分鍾，再將預先秤好的b、c溶質分別加入玻璃中，立即用膠塞塞緊，並用鋁蓋固定，121℃滅菌30分鍾備用。

【用途】

  分離培養和鑒定甲烷細菌。

【注意事項】

  液體培養基在使用之前，要用無菌注射器先經無氧N₂衝洗，然後取一定量的b、c溶液注入培養液a中，

充分搖勻後再接種。固體滾管培養基，加熱溶化後冷卻至55℃左右，加入一定量的b、c溶液，充分搖勻後，立即在冰屑上迅速滾動，使培養基在管壁均勻凝固，然後用無菌接種環取少量菌體，在滾管壁培養基上劃線，同時充入無氧的N₂/CO₂,或H₂/CO₂(80/20)，接種完畢立即塞緊膠塞培養。

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