【原理】
人尿含有約2%尿素、適量的NaCI及緩衝鹽等,又有少許有機物及某些微量元素, pH微酸性至中性,本培養基適於一般細菌生長,如再加少量葡萄糖及蛋白腖提供營養的碳源及氮源,則可促進細菌加快繁殖。其中產生尿素酶的細菌,即迅速分解尿中的尿素產生氨,使附加的酚紅指示劑由淡黃色(pH6.8)變呈鮮紅色(pH>8.1),可在10分鍾至4小時內看出結果,比一般尿素培養基反應快。雖然許多種細菌也分解葡萄糖產酸,但量少,不影響結果,且使陰性反應更明顯。又因尿液緩衝力弱, pH變色敏感。
【成分】
新鮮男人尿(中段尿)
100ml
蛋白腖
0.1g
葡萄糖
0.1g
0.2%酚紅水溶液
0.5~1ml
【製法】
(1)先用酒精擦拭消毒男人尿道口周圍,最先排棄第1段的尿,留取排出的中段尿盛於無菌容器內,然後排棄剩餘的尿;
(2)以無菌量筒或大吸管取90ml新鮮中段尿盛於瓶內,稱蛋白腖及葡萄糖各0.1g溶於10ml水中,煮沸滅菌5分鍾後,加於尿液內,再加0.2%酚紅水溶液0.5~1ml ,分裝於無菌試管內約3ml,即可使用。如尿液混濁有沉澱,可放在50℃的溫水浴中加熱溶解片刻即清澄。
【用途】
用於鑒定能分解尿素的細菌(尿素酶陽性),以與其它菌類區別。分解尿素的細菌計有下列各種。
主要是大多數變形杆菌,各種布魯氏菌,未分類的第Ⅳ組產堿杆菌,不產色杆菌屬(Achromobacter)中生物1型及2型菌,假單胞樣杆菌(Pseudomonaslike bacteria)中若幹組、型細菌,變黑歐文氏菌(Erwinia nigrifluens),尿素巴斯德杆菌(Pasteurellaurease),支氣管敗血鮑德氏杆菌(Bordetella bronchiseptica),肺炎克雷伯杆菌(kledsiella pneumoniae)苯基丙酮摩納克斯氏菌(Moraxella phenylpyruvica)等。
【注意事項】
1、尿液培基快速檢測時應將細菌較多量接種上述液體人尿培養基中,在37℃孵箱或水浴箱中孵育,隔10、30、60分種及小時各觀察1次,如培養基不變,呈紅色,則繼續孵育12~24小時後再觀察。培養基由橘黃色行呈鮮紅色者,表明尿素已被細菌產生的尿素酶分解,產生堿(PH>8.1)。注意初次接種菌量不宜太少,且需取純菌接種。
2、用人尿瓊脂基檢測時，取高壓蒸汽滅菌過的15%~20%瓊脂加熱溶化,待冷至50℃溶融時,以10ml加入於上記人尿液培養基90ml中(注意須先將人尿液培養基放在水浴中臨時加溫至50℃,以防加入瓊脂培養基時遇冷立即凝固),混勻後,趁溫熱分注於無菌試管內,每管3~5ml,斜置於台上,待凝固成有2cm底層和3cm斜麵,使用時隻接種細菌於斜麵上,不穿刺接種於底層,37℃培養4~6小時,如為快速分解尿素的細菌,則在斜麵上產生大量的堿性反應,並滲透入全部底層中,故呈鮮紅色,若是緩慢分解尿素的細菌,則先在斜麵呈紅色,需培養數日後始見底層逐漸全呈紅色;不分解尿素的細菌,始終不產堿變色。
3、對於營養要求較高的細菌,需在上述人尿液培養基中加酵母膏至0.3%~0.5%(先配成10%浸液滅菌後加入),加無菌未滅能的牛血清或馬血清1%。有時還可加氯高鐵血紅素(hemin)或羥高鐵血紅素(hematin)0.5mg/100ml培基。
4、對於檢測厭氧菌尿素酶反應,可在人尿液體培養基或人尿瓊脂固體培養基中添加巰基乙酸鈉0.1%~0.2%(水溶,煮沸滅菌後加入)。接種細菌後在37℃中培養。
(第二軍醫大學 葉天星供稿)
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