一、弧菌簡介
弧菌是一種可以在溫帶水環境下發現的細菌屬。他們通常具有共同的特征和習性。如：
（1）革蘭氏陰性，短小彎曲弧狀，無芽孢，多數有鞭毛、菌毛（如圖1）；
（2）具有一端單生鞭毛，運動迅速；
（3）多數菌株生長需要2%-3%氯化鈉；
（4）最適生長溫度為30℃-37℃；
（5）對熱敏感，90℃ 1min即可殺死，50℃ 20min或65℃ 5min也可達到殺菌效果；
（6）耐堿怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡。
圖1 弧菌的顯微形態
二、樣品處理規定
對於可能含有弧菌的樣品的保存和檢驗，各相關標準均作了規定：
（1）非冷凍樣品采集後應立即置7℃～10℃冰箱保存，盡可能及早檢驗（GB4789.7-2013 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗）；
（2）新鮮樣品采集後應於3h內完成檢驗，若不能在規定時間內完成，則應將樣品置於7℃～10℃條件下保存，並盡可能在24h內完成檢驗（GB4789.44-2020 食品微生物學檢驗 創傷弧菌檢驗）；
（3）樣品采集後應立即在7℃～10℃保存，24h內檢驗。如果樣品需要冷凍，於-18℃保存，24h內檢驗。為了最大限度地保證弧菌的存活率，應避免樣品與冰直接接觸（SN/T 1022-2001 進出口食品中霍亂弧菌檢驗方法）。
通常來說，樣品保存需放在4℃條件下，但弧菌檢驗標準中，對樣品的保存條件，均要求7℃～10℃，特意避開了4℃，這是因為創傷弧菌在4℃條件下極易形成活而不可培養的狀態（參考GB4789.44-2020 食品微生物學檢驗 創傷弧菌檢驗）。
三、保存溫度
基於弧菌對溫度的敏感性，實驗室在保存弧菌的標準菌株的時候，也要注意溫度條件。對於儲備菌株，有條件的可以保存在-70℃超低溫冰箱中，一般室溫指25℃左右，因為白天晚上會有溫差，除非有溫控設備，否則沒辦法保證一般環境溫度在25℃-28℃之間，其實隻要溫度不是太高，放在室內環境中短期內是沒有問題的。
對於真空冷凍幹燥的菌株，未開封狀態下於-20℃冰箱中至少可以保存2年。
對於工作菌株，本實驗室在長期工作實踐中發現，由於冬天室溫偏低（不高於10℃），也不利於弧菌的保存。一周內所劃平板，盡管也有尚存活的弧菌，但其活力已遠不能滿足試驗可靠性需要，因此為能保證每次試驗的可靠性，建議每次接菌都用前一天在3%NaCl TSA平板上劃線培養所得的新鮮菌落；為保證試驗的連續性，在試驗階段應該每天劃平板培養；培養好的平板，用完後直接放回培養箱，當天下午下班前拿出滅菌丟棄。
務必記住，弧菌液體試管和劃線後的平板，一定不能放置在4℃冰箱中。
四、純化培養與菌懸液製備
因為多數弧菌具有嗜鹽性，而在無鹽的環境中生長不好甚至不生長，因此在培養該菌時，通常需要加入2%-3%的NaCl，而在初步篩選出該菌後進行純化時，各標準都要求用含3%NaCl的營養瓊脂進行純化，也是基於這個原因。
為方便副溶血性弧菌的鑒定，我公司開發出了副溶血性弧菌鑒定條和嗜鹽試驗係列生化管（編號分別為HBIS02、GS014、GS015、SN052、GS016），在使用這些產品時，需要挑取純化的菌落做成菌懸液，再往管中滴加，此時需要注意，務必使用0.85%生理鹽水進行菌懸液的製備，而不能用無菌純淨水，並且製成菌懸液後要盡快滴加完畢，否則會影響結果的判定。
試驗證明，用生理鹽水製備的菌液，放置1h後菌數降低至初始狀態的50%左右；而用純水製備的菌液，放置1小時幾乎無活菌。即使稀釋後立即塗布，純水懸液中的菌數也會迅速降至生理鹽水稀釋液中菌數的10%以下（如圖2）。
圖2 副溶血性弧菌ATCC 17802用純水和生理鹽水稀釋後放置不同時間後的菌數
綜上所述，為保證菌種的存活，弧菌菌種應在-70℃超低溫保存或室溫，一定不能放在4℃環境保存；為保證試驗結果的準確性，弧菌鑒定試驗中，應該盡量用新鮮的菌板，挑單菌落至無菌生理鹽水製成菌液，製成的菌液不宜擱置時間太長，必要時需要重新製備。
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相關標準：
GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌檢驗 點擊下載
GB 4789.44-2020 食品微生物學檢驗 創傷弧菌檢驗 點擊下載
SNT1022-2010 進出口食品中霍亂弧菌的檢測方法 點擊下載
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