一、單增李斯特氏菌簡介：
單核細胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）簡稱單增李斯特氏菌，廣泛分布於自然界中，如土壤、水、汙水和腐爛的植被中都有被發現，很容易汙染食品，引起人的食物中毒。根據已發表的文獻數據，可從巴氏殺菌奶、幹酪、煮熟待吃的甲殼類、熏製的海鮮、三明治、新鮮水果和蔬菜及生貝類中檢出。由於單增李斯特氏菌在低溫條件下，可以緩慢繁殖，所以也可從冰激淩等冷凍食品中檢出。因此，在食品衛生微生物檢驗中，必須加以重視。
二、李斯特氏菌顯色培養基檢驗原理：
《GB 4789.30-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗》中，李斯特氏菌顯色培養基為必選的選擇性分離和計數培養基。
李斯特氏菌顯色培養基是青島高科技工業園betway必威西汉姆联生物技術有限公司研製，可快速檢測食品和藥品中單增李斯特氏菌。蛋白腖提供氮源和氨基酸，氯化鈉維持滲透壓，瓊脂是凝固劑，氯化鋰抑製革蘭氏陰性菌生長，抑菌劑抑製除李氏菌外的革蘭氏陽性菌生長。根據單增李斯特氏菌生長代謝產生其特有葡萄糖甘酶及酯酶的特征，在培養基中加入相應的酶顯色底物，單增李斯特氏菌在該培養基上生長，產生特有的菌落形態：菌落呈藍綠色，其周圍有一不透明環，從而使單增李斯特氏菌得到分離鑒別。
三、培養基配方：
基礎培養基（g/L）：
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營養物質 |
70.0 |
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顯色劑 |
6.0 |
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pH 7.2±0.2 25℃ |
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李斯特氏菌添加劑6.0 g、李斯特氏菌抑菌劑（凍幹粉）1 mL*5支
※ 此配方可以進行改良或增加營養成份以獲得最佳的結果。
四、試驗方法：
1. 配製培養基：稱取基礎培養基14.2 g加入180 mL蒸餾水，加熱溶解並不停攪拌；另取1.2 g李斯特氏菌添加劑，加入20 mL無菌水，並加入一些玻璃球，不停振動1-2 min，使其混合均勻，將二者分別於121℃高壓滅菌15 min。冷至50℃左右時，把李斯特氏菌添加劑加入基礎培養基中，並加入複溶後的李斯特氏菌抑菌劑1支，混勻，傾入無菌平皿。使培養基的厚度約為2-3 mm，這樣有利觀察不透明環。
使用前，把製備好的培養基放置室溫10-20分鍾。
2. 按SN標準、GB標準、FDA標準、ISO標準或其它標準製備樣品液；
3. 把樣品液加入李氏增菌肉湯（LB1、LB2）中增菌；或把樣品液和Half-Fraser增菌液按照1:10的比例混勻，30℃培養24小時；或其它增菌液中增菌培養；
4. 取一環增菌液劃線接種到李斯特氏菌顯色培養基上，36℃±1℃培養24-48小時。
五、試驗結果判斷：
接種以下質控菌株，放置37℃需氧培養24-48小時。
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質控菌株 |
菌株編號 |
接種量 （CFU） |
參比或計 數培養基 |
方法 |
質控 結果 |
其他特征 |
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單增李斯特氏菌 |
ATCC19115 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.5 |
藍綠色菌落，帶白色暈環 |
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英諾克李斯特氏菌 |
ATCC33090 |
/ |
/ |
定性 |
/ |
藍綠色菌落，無白色暈環 |
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西爾李斯特氏菌 |
/ |
/ |
/ |
定性 |
/ |
藍綠色菌落，無沉澱環 |
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綿羊李斯特氏菌 |
/ |
/ |
/ |
定性 |
/ |
藍綠色菌落，有沉澱環 |
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大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
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鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC14028 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
白色小菌落 |
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糞腸球菌 |
ATCC29212 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
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金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
|
黑曲黴 |
ATCC16404 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
圖1 質控菌株在李斯特氏菌顯色培養基上的生長情況
注：A:單增李斯特氏菌ATCC 19115；B:英諾克李斯特氏菌ATCC 33090；C:西爾李斯特氏菌ATCC 35967；D:綿羊李斯特氏菌ATCC 19119；E:大腸埃希氏菌ATCC 25922；F:鼠傷寒沙門氏菌ATCC 14028；G:糞腸球菌ATCC 29212；H:金黃色葡萄球菌ATCC 25923；I:黑曲黴ATCC 16404；
六、說明：
李斯特菌屬的菌在此培養基上都是藍綠色菌落，但隻有單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌藍綠色菌落周圍有一層暈圈。單增李斯特氏菌與綿羊李斯特氏菌可以通過溶血環大小得到區分。因此，李斯特氏菌顯色培養基效果明顯優於PALCAM等傳統培養基。
七、注意事項：
1. 貯存：製備好的固體平板保存於2-8℃，應避免光線直接照射。幹燥培養基應放置於陰暗幹燥處，保存溫度2-8℃。
2. 失效：幹燥培養基超過保質期、結塊和顏色變化都不能使用。
3. 嚴格按照標簽說明進行配製培養基，避免混合時培養基和添加劑溫度過高導致平板出現絮狀物。
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